Stbl3 热敏感受态细胞

Stbl3 Chemically Competent Cell

保存条件： -80℃

产品规格:10×100μl

基因型：F- mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20(StrR) xyl-5λ-leu mtl-1 endA1+

简要说明:Stbl3 菌株来源于 HB101 E. coli strain，是慢病毒载体系统推荐使用的菌株。

基因组含有重组酶 recA13 突变，可有效抑制长片段末端重复区的重组，降低错误重组的概率；但不含核酸酶 endA1 突变，体内核酸酶含量较高，提取质粒时务必使用质粒提取试剂盒中去蛋白液。此菌株具有链霉素抗性，不存在 lacIqZΔM15，不可用于蓝、白斑筛选。 High5TM 系列 Stbl3感受态细胞经特殊工艺制作，经 pUC19 检测转化效率>108cfu/μg DNA。

操作说明：

1. Stbl3 感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速

插入冰中），加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰上静置 25 分钟。

2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入 0.9 mL 室温 S.O.C. 培养基，使用其他培养基会降低转化效率。

4. 30℃，225 rpm 复苏 90 分钟。 （当质粒中含有不稳定片段时， 30℃培养可降低错误重组的概率，若转化 control PUC19 计算转化效率，则需 37℃， 225 rpm 复苏 60 分钟。）

5. 5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的S.O.C. 培养基上。

6.将平板倒置放于 30℃培养箱过夜培养。（若转化 control PUC19 计算转化效率，则需 37℃培养过夜）

注 意 事 项：

1.感受态细胞*在冰上融化。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。