XL2-Blue 热敏感受态细胞

XL2-Blue Chemically Competent Cell

保存条件： -80℃

产品规格:10×100μl

基因型：TetRΔ(mcrA)183 Hte[F′{proAB lacIq lacZM15Tn10(TetR)AmyCamR}](mcrCB-hsdSMR-mrr)173endA1 supE44thi-1 recA1 gyrA96 relA1

简要说明:o XL2-Blue 菌株来源于 XL1-Blue 菌株，为 Hte(high transformation efficiency)基因型，Hte 是Stratagene 开发的特异性提高感受态转化效率及大质粒转化能力的宿主菌基因型，已成功应用于 40kd质粒的构建。

Hte 使得 XL2-Blue 适用于大质粒 DNA 和重组产物的转化，降低片段大小的偏爱性，多用于文库构建。recA1 和 endA1 的突变有利于插入 DNA 的稳定和高纯度质粒 DNA 的提取。

hsdSMR 突变导致 EcoK 核酸内切酶系统缺失，增强了外源 DNA 的稳定性和提取质量。 lacZΔM15 的存在使 XL2-Blue 菌株可用于蓝、白斑筛选。此菌株具有四环素和氯霉素抗性。

AngYuBio High5TM 系 列 XL2-Blue 感 受 态 细 胞 经 特 殊 工 艺 制 作 ， 经 pUC19 质 粒 检 测 转 化 效率>1×109cfu/μg。

操作说明：

1.XL2-Blue 感受态细胞放置冰中融化（或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅

速插入冰中），加入目的 DNA（质粒或连接产物）并用手拨打 EP 管底轻轻混匀，冰上静置 25 分钟。

2. 42℃水浴热激 45 秒，迅速放回冰上并静置 2 分钟，晃动会降低转化效率。

3. 向离心管中加入 700μl 不含抗生素的无菌培养基（2YT 或 LB），混匀后 37℃，200 rpm 复苏 60 分钟。

4. 5000rpm 离心一分钟收菌，留取 100μl 左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的 2YT 或LB 培养基上。

5.将平板倒置放于 37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放 37℃培养至少 14h。

注意事项:

1. 加入 DNA 时体积不应大于感受态体积的 1/10。

2. 电击感受态细胞加入电击杯应避免产生气泡，气泡会增加弧光放电风险。

3. 当 DNA 不纯或存在盐，乙醇，蛋白及缓冲液等污染时，转化效率急剧下降。

4. 电击杯里的离子可增加溶液的电导，增大在含有细胞和 DNA 的溶液中产生电流和弧光放电的风险。

5. 若转化大质粒或想获得较高转化效率，推荐使用高纯质粒提取试剂盒提取质粒。质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。

6. 对于连接产物转化，*转化前乙醇沉淀 DNA 后用适量 TE 缓冲液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重悬产物，保证 DNA 浓度不超过 100 ng/μl。过高浓度连接产物或过大体积连接产物会降低转化效率，增加弧光放电的风险。

7. 混入质粒时应轻柔操作，吸取感受态细胞时不可用孔径过小的枪头 (普通 200ul 枪头应剪去枪头尖 0.6cm) 避免用力过猛，以免剪切力过大损伤细胞膜，降低转化效率。转化高浓度的质粒或连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。

8. 电击感受态细胞*保存在-80℃以下，高于-80℃超期储存会导致转化效率会下降。

注意事项：

1.感受态细胞*在冰上融化。

2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。

3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。