AviTag融合蛋白生物素化试剂盒

中文名称：

AviTag融合蛋白生物素化试剂盒

英文名称：

AviBiotinylation Kit

AviTag融合蛋白生物素化试剂盒产品规格：

65次

发货周期：

1～3天

AviTag融合蛋白生物素化试剂盒

??生物素连接酶由大肠杆菌BirA基因编码，通过重组大肠杆菌表达后多次纯化获得的高纯度酶制剂，分子量为35KD。生物素连接酶（Biotin Ligase,BirA EC 6.3.4.15）能够活化生物素，生成生物 素酰 -5′-腺苷酸，进而将生物素特异地转移到生物素受体蛋白（如 AviTag融合蛋白）上，使目标蛋白生物素化。
试剂盒组成：

Biotin Ligase储存缓冲液：50mM Imidazole, 50mM NaCl, 5% Glycerol, 5mM Mercaptoethanol, pH 6.8
10×Biotin Ligase Buffer A：0.5M Bicine，pH 8.3
10×Biotin Ligase Buffer B：100mM ATP, 100mM MgOAc, 500μM D-Biotin
D-Biotin：500μM D-Biotin

产品用途：
生物素受体蛋白的生物素化，特别是AviTag融合蛋白的生物素化，可以位点特异性的Biotin修饰目标蛋白，用于亲和纯化，基于biotin-avdin/streptavidin的检测如BIAcore传感片SA的亲和力检测等。由于修饰位点在标签上，对目标蛋白与靶分子结合的影响降到*。

产品特点：
特异性高：只修饰生物素受体蛋白，位点特异性生物素化，对目标蛋白影响最小
操作简便：纯化或未纯化的蛋白加入相应试剂后30℃保温即可

常用缓冲体系：
总体积25μl，于30℃孵育 30～60 min使底物充分生物素化。

使用建议：
氯化钠（>100mM）、甘油（>5% W/V）、硫酸铵（>50mM）等许多常见的缓冲液成分会抑制生物素连接酶的活性。当底物蛋白（多肽）确有必要使用这些试剂时，应尽量降低浓度。本产品的生物素连接酶经严格质量控制，没有蛋白酶活性。如果用于生物素化的底物蛋白是未经纯化的粗提蛋白，建议加入适量的蛋白酶抑制剂，以防止在生物素化的过程中发生降解。

应用实例：

图例一）：目标蛋白生物素后回收率约70%
1.生物素化蛋白混合液
2.Avidin亲和纯化流出
3.Avidin亲和洗脱
M.蛋白中分子量Marker 

活性定义：底物蛋白（多肽）浓度为38μM的条件下，于30℃孵育30min，将1pmol蛋白（多肽）生物素化所需的酶量定义为一个活性单位。

质量保证：生物素连接酶通过离子交换、疏水层析等多步纯化，纯度大于95%，无蛋白酶与其它酶活性残余。

储存条件：-20℃。