小分子蛋白电泳试剂盒

中文名称：

小分子蛋白电泳试剂盒

英文名称：

Small molecule protein electrophoresis Kit

小分子蛋白电泳试剂盒产品规格：

10次

发货周期：

1～3天

小分子蛋白电泳试剂盒

本试剂盒含有小分子蛋白电泳(多肽电泳)全套试剂，可以用来检测1-20kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶(8×10cm)。
试剂盒特点：
1 适用范围广：2×多肽电泳缓冲液和2×PAA溶液中不含有SDS，适用于多肽的变性和非变性电泳。
2 分辨率高：凝胶缓冲液独特配方，可以有效分离1-5kD多肽。
3 稳定性高：凝胶缓冲液pH为中性，存放时间长。
4 使用方便：配制凝胶时只需1:1混合2×凝胶缓冲液和2×PAA溶液，加上APS和TEMED即可配制凝胶。

试剂盒组成：

使用方法：

一、10% APS配制：

10% APS配制-5 ml：将APS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

二、制胶：

I 配制分离胶
1、按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

表一：(一块1 mm mini胶用量)*

注： 
* 如非必须，不要使用厚度1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
** 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据表二的标准条件调节催化剂的加入量。

表二：超低凝胶制备凝固时间表

2、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的无水乙醇层，使凝胶表面保持平整。
3、静置5-10分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1、按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
2、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
3、静置20-30分钟待凝胶聚合

三. 电泳：

10×Tricine-Tris-SDS缓冲液配制：
将10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS)粉末(Cat No：CB010P)置于一干净的一升烧杯中，加入500ml超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500ml的10×TTS缓冲液。

表三：1×TTS缓冲液配制

注：伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用500ml 1×TTS缓冲液。

将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液，轻柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品(已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No：TP050]处理)加入点样孔，稳压电泳(表四)，至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。

表四 多肽电泳条件

四、染色(使用组分9-QuickLan蛋白染色液)：

用前必读：
1、使用前如发现瓶中有少许沉淀，请混匀后使用。
2、以下“使用方法”是针对0.75mm和1.0 mm厚度，10×10cm凝胶染色程序。

使用方法：
1、将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适)，条带1-2分钟即可见。
2、摇床上常温摇动10-15分钟。
3、观察结果。

注意事项：
1、使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm和1mm的凝胶，如果使用更大面积或更厚的凝胶，请加入更多的染色液并延长染色的时间。
2、常规染色所需的漂洗，固定，脱色步骤都无必要。
3、本染色液可以重复利用1-2次，敏感性会有轻微下降，请延长染色时间。
4、本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。使用后，请盖好瓶盖，常温密封保存。

储存条件：4℃，有效期一年