EHA101农杆菌感受态细胞

中文名称：

EHA101农杆菌感受态细胞

英文名称：

EHA101 Chemically Competent Cell

EHA101农杆菌感受态细胞产品规格：

10×100μl/50×100μl

发货周期：

1～3天

EHA101农杆菌感受态细胞

EHA101菌株为C58型背景，核基因中含有筛选标签——利福平抗性基因rif，为了便于转化操作，此菌株携带一无自身转运功能的胭脂碱型Ti质粒pEHA101(pTiBo542DT-DNA)，此质粒含有vir基因(vir基因是T-DNA插入植物基因组必需的元件，pEHA101(pTiBo542DT-DNA)质粒自身的T-DNA转移功能被破坏，但可以帮助转入的双元载体T-DNA顺利转移)。
pEHA101(pTiBo542DT-DNA)型Ti质粒含有筛选标签：strep、kan，赋予EHA101菌株链霉素抗性和卡那霉素抗性，适用于玉米、水稻、烟草等植物的转基因操作，经pK7WGF2质粒检测转化效率可达104 cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃

基因型：
C58(rif R)Ti pEHA101(pTiBo542 D T-DNA)(kanR，strepR)Nopaline
操作说明：
1.取-80℃保存的农杆菌感受态于冰上待其部分融化，处于冰水混合状态时插入冰中。
2.每100 μl 感受态加1 μg(体积不大于10 μl)质粒DNA，用手拨打管底混匀，依次于冰上静置5分钟、液氮5分钟、28℃水浴5分钟、冰浴5分钟。
3.加入700 μl无抗生素的LB或YEB液体培养基，于28℃，200rpm 振荡培养2~3小时。
4.6000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块涂布于含相应抗生素的LB或YEB平板上，倒置放于28℃培养箱培养2-3天。
注意事项：
1.加入质粒时体积不应大于感受态体积的1/10；质粒不纯或存在乙醇等有机物污染，转化效率急剧下降；质粒增大一倍，转化效率下降一个数量级。
2.混入质粒时应轻柔操作，转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
3.利福平浓度不应高于25 μg/ml，过高的利福平浓度不利于农杆菌生长，会降低其生长速度和转化效率。本公司感受态计算转化效率时所用平板只含有50 μg/ml kan，若所用平板同时含有20 μg/ml rif则转化效率降低到1/2。
4.培养基中加入利福平的目的是防止杂菌生长、筛选农杆菌；根据所用菌株抗性加入链霉素或庆大霉素可防止Ti质粒丢失，但链霉素不利于农杆菌的转基因操作，所以一般培养农杆菌时不考虑链霉素或庆大霉素，Ti质粒丢失的概率极低(可以忽略)