DH5a感受态细胞

中文名称：

DH5a感受态细胞

英文名称：

DH5a Competent Cells

DH5a感受态细胞产品规格：

10×100μl

发货周期：

1～3天

DH5a感受态细胞

大肠杆菌经Ca离子处理后可摄取外源DNA(Plasmid、Phage DNA)，处于这种状态的细胞称作感受态细胞。在进行基因重组时，使用感受态细胞的转化实验应用十分广泛。制作基因文库、重组质粒体以及进行亚克隆实验时，特别是目的基因含量十分低的情况下时，使用高效的感受态细胞十分重要。使用pUC57质粒检测该DH5a感受态细胞，转化效率可达10⁷～10⁸。在-70℃下保存数月转化效率不发生明显降低。
操作方法：
1．取出感受态细胞，置于冰上5分钟，解冻。
2．向感受态细胞中加入1～10μl连接产物，轻弹离心管底部混匀，冰上放置30 min。
3．置于42℃热激60s后，迅速置于冰上急冷2分钟。
4．向热激完毕的感受态细胞中，加入700μl经37℃预热的LB(或SOC)培养基(不含抗生素)，37℃振荡（225 rpm）培养1小时。目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。
5．室温4,000 rpm离心5分钟，弃去700μl上清后，用剩余100μl培养基重悬细胞并涂布到含相应抗生素的LB琼脂平板表面。
6．将平板置于37℃培养，12～14小时后可出现菌落。

注意事项：
1. 感受态细胞应保存在-70℃，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。
2. 所有操作均需注意无菌操作。
3. pUC18 plasmid 标准品（0.2ng/μl），含有氨苄青霉素抗性，作为阳性对照使用，每次转化5μl，可以得到约100～1000个克隆。

常见问题分析：

问题：转化具有氨苄青霉素抗性的平板出现卫星菌落
原因分析：有些载体带有β-内酰胺酶的基因，表达出β-内酰胺酶，它可以破坏氨苄青霉素。当细菌培养时间过长，β-内酰胺酶积累过多，就会使氨卞青霉素失效，导致不含质粒的空菌落大量生长，这就是卫星菌落。由于生长时间较短，故卫星菌落一般较小，星状分布，环绕在中心菌落周围，卫星菌落由此得名。在克隆过程中挑取中心的大的克隆子一般对结果不会有什么影响。 
解决方法：
（1）通常氨苄青霉素抗性的平板推荐使用浓度为200ug/ml；
（2）培养时间通常12个小时即可看到阳性克隆，培养超过16h后，易出现卫星菌落，如出现卫星菌落挑取中心大克隆，不影响实验结果。

储存条件：-80℃可保存一年