BL21-Star(DE3)pLysS化学感受态细胞

中文名称：

BL21-Star(DE3)pLysS化学感受态细胞

英文名称：

BL21-Star(DE3)pLysS Chemically Competent Cell

BL21-Star(DE3)pLysS化学感受态细胞产品规格：

10×100μl/50×100μl

发货周期：

1～3天

BL21-Star(DE3)pLysS化学感受态细胞

BL21 Star(DE3)pLysS菌株来源于BL21(DE3)，含有rne131突变(RNaseE基因)，RNaseE基因的突变降低了內源RNase的积累，增强菌株细胞内mRNA的稳定性，从而提高异源蛋白的表达水平。
主要适用于T7启动子表达载体(如 pET系列)的高水平蛋白表达，同时含有大肠杆菌RNA聚合酶，也可用于非 T7启动子表达载体(pGEX，pMAL等)的蛋白表达。由于BL21 Star(DE3)菌株的异源基因基础表达水平较高，所以不适合毒性蛋白的表达。BL21 Star(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，具有氯霉素抗性。pLysS含有表达T7溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大肠杆菌细胞壁上的肽聚糖溶解大肠杆菌，还可与T7 RNA聚合酶结合抑制其转录活性，进而降低目的基因的背景表达水平，但不干扰IPTG诱导的表达。pLysS质粒含有p1*复制起始子，可以和含有pUC或pBR322等复制起始子的质粒兼容。
BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞由特殊工艺制作，pUC19质粒检测转化效率达107 cfu/μg DNA。
保存条件：-80℃

基因型：
F-ompT hsdSB(rB-mB-)gal dcm rne131(DE3)pLysS(CamR)
操作说明：
1.BL21 Star(DE3)pLysS感受态细胞从-80℃拿出，迅速插入冰中，5分钟后待菌块融化，加入目的质粒并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰中静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基(2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4.5000 rpm离心一分钟收菌，留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。
注意事项：
1.感受态细胞*在冰中缓慢融化，插入冰中8分钟内加入目标DNA，不可在冰中放置时间过长，长时间存放会降低转化效率。
2.混入质粒时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒可相应减少最终用于涂板的菌量。
4.诱导时，IPTG浓度可选(0.1-2mM均可)。
5.为获得需要量的蛋白，*诱导时间，温度，IPTG浓度需实验者优化。
6.BL21 Star(DE3)pLysS菌株携带pLysS质粒，除复苏培养基为无抗生素外，其余所用培养基、培养液均应含有34μg/ml氯霉素，以防质粒丢失