Rosseta(DE3)感受态细胞

中文名称：

Rosseta(DE3)感受态细胞

英文名称：

Rosetta(DE3) Competent Cell

Rosseta(DE3)感受态细胞产品规格：

10×100μl

发货周期：

1～3天

Rosseta(DE3)感受态细胞

本品是在具有大肠杆菌BL21菌株基础上制备的化学转化感受态细胞，补充大肠杆菌缺乏的6种稀有密码子（AUA, AGG, AGA, CUA, CCC, GGA）对应的tRNA，提供外源基因（尤其是真核基因）在原核系统中的表达水平。经pUC19质粒检测，转化效率可达10^7 cfu/μg。本品具有氯霉素抗性。
注意事项

1）感受态细胞冰水浴中解冻后应立即使用，避免反复冻融。
2）待转化DNA加入感受态细胞后，请勿用移液枪吹打，轻轻弹匀即可。
3）为确保*效率转化，整个操作过程应尽量轻柔，并保持低温。
4）本品应于-80℃保存，请勿将感受态细胞储存于-20℃或液氮中保存。
5）整个转化过程请于无菌条件下操作。
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用方法

1）将感受态细胞从-80℃中取出，置于冰水浴中融化。
2）将待转化DNA加入到100 μl感受态细胞中，轻轻弹匀，冰上孵育30分钟。
① 通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA所饱和；
② 待转化DNA加入体积不要超过感受态细胞体积的1/10。
3）42℃水浴，不要晃动，准确热激45s后，立刻置于冰水浴中，静置2-3分钟。
4）向离心管中加入900 μl 不含抗生素的LB或SOC培养基，混匀。
5）150 rpm, 37℃振荡培养45分钟，使菌体复苏，抗性基因表达。
6）取适量已转化细胞，加到含相应抗生素的固体培养基上，轻轻涂匀。剩余菌液可在4℃保存，一周之内都可重新涂板。
【注】：如菌体量较少，也可2,500 g离心5分钟，去掉900 μl上清。用剩余培养基将菌体重悬，用无菌涂布棒在含有正确抗性的平板上轻轻涂匀。
7）室温正置10分钟。待菌液被平板吸收后，37℃倒置培养过夜。

储存条件：-80℃