NGS文库富集试剂

中文名称：

NGS文库富集试剂

英文名称：

NGS Library Amplification Reagent

NGS文库富集试剂产品规格：

24次|96次

发货周期：

1～3天

NGS文库富集试剂

本制品是专为illumina高通量测序平台DNA文库扩增优化的PCR反应试剂，扩增所得DNA序列高度保真、无碱基偏好性。试剂中所包含有的P5/P7 Primers Mix是正向和反向引物的混合液，适用于两侧含有P5及P7序列的文库DNA片段的扩增。如果选用其他引物，请参照相应的供应商说明书。若使用Fragmentation/End repair/dA-tailing Reagent（WH0208-01/02)进行文库构建，当上样量低于100ng时需要对文库进行扩增。
产品特点：
·扩增保真性高，无碱基偏好性。
·高扩增效率，可对低至1 ng起始文库DNA进行富集。
·包含P5/P7引物，直接用于illumina平台DNA文库的富集。

产品组成：

保存条件：-25~-15℃保存，避免反复冻融，保质期为一年。

注意事项：（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）
1．操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。
2．请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。
3．试验开始前，请清洁操作台，并使用RNA酶及DNA清除试剂，如RNase Away处理台面。确保没有RNA酶和DNA的污染。
4．进行文库扩增前，请确保PCR仪已经调试好并处于稳定的状态。
5．试验前请仔细阅读说明书，如果需要暂停试验，或者无需立即进行下游试验。可根据说明书推荐将试验产物保存于-20℃并安排后续试验。

推荐使用的其他试剂：
1．Fragment/Repair/Tailing Reagent（WH0208-01/02)
2．End Repair/dA-Tailing Reagent（WH0209-01/02)
3．Fast Ligation Reagent（WH0201-01/02)
4．BECKMAN Agencourt AMPure XP磁珠

操作步骤：

1．将2×HiFi PCR MasterMix和P5/P7 Primers Mix （10μM each)置于冰上融化，短暂混匀。
2．按下表设置PCR仪反应程序，开启热盖，温度设置于105℃。

*注：请根据DNA的质量和上样量确定PCR循环数。一般而言，对于100ng、10ng、1ng文库起始DNA，在进行PCR富集时分别需要扩增6、10、12个循环。如果在PCR富集之前经过片段大小筛选步骤（size-selection)，则建议在原有基础上再增加2-4个循环；如果DNA质量较差（比如提取于FFPE样品)，则建议在原有基础上再增加1-3个循环。

3．按照下表配制PCR体系，注意此步骤需于冰浴中操作。

注：对于多个样品，请计算所需试剂的总体积并在此基础上额外添加10%，以避免分装过程中枪头挂壁损失而导致试剂体积不足。
4．将纯化后的带有adapter的文库连接产物20μl转移至PCR管中，加入30 μl步骤3中配制好的PCR反应液，轻柔吸打6-8次混匀。
? 注：配制反应体系时，请全程将反应管置于冰上进行操作。
5．瞬时离心后将PCR反应管置于PCR仪内，按步骤2反应程序进行扩增。
6．当PCR样品温度降至4℃，将PCR产物取出并使用1×体积（50 μl)Agencourt AMPure XP磁珠进行纯化。
a)将Agencourt AMPure XP磁珠置于室温平衡20min。
b)涡旋Agencourt AMPure XP磁珠使充分悬浮，加入50 μl磁珠至PCR产物中，充分吸打混匀。
c)室温孵育5 min，将反应管置于磁力架上1~2 min，至磁珠完全贴壁后，用移液器小心移除上清。
d)从磁力架上取下反应管，加入200 μl 80%乙醇洗涤，轻弹混匀洗涤磁珠。将反应管置于磁力架上1~2 min，至磁珠充分贴壁，弃上清，回收磁珠。
e)重复步骤d）1次。
f)将含有磁珠的反应管置磁力架上，开盖室温晾干10 min至干燥为止。
? 注：不要过分干燥磁珠，否则会造成得率降低。
g)加入32.5 μl 10mM Tris-HCl（pH 8.0）至离心管内并使用移液器吸打使磁珠充分悬浮。使用磁力架使磁珠充分贴壁后，转移30 μl上清至新的离心管中。
7．上机测序前可使用凝胶电泳、qPCR定量或者Agilent生物分析仪对DNA文库质量进行鉴定。纯化后得到的DNA文库可保存于-20℃。

首页 ?|? 关于我们 ?|? 联系我们 ?|? 在线咨询 ?|? 网站地图