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| 产地 | 中国/上海 |
| 品牌 | 上海联迈生物工程有限公司 |
| 货号 | LM-0109 |
| 保存条件 | 4℃保存 |
| 英文名称 | BaiExact Genotyping qPCR PreMix（Probe) |
| CAS编号 | |
| 保质期 | 一年 |
SNP基因分型PCR试剂（探针法)
中文名称：
SNP基因分型PCR试剂（探针法)
英文名称：
BaiExact Genotyping qPCR PreMix（Probe)
SNP基因分型PCR试剂（探针法)产品规格：
125次|500次
发货周期：
1～3天
SNP基因分型PCR试剂（探针法)
本制品是一款专门应用于探针法SNP检测的即用型2×浓度的热启动PCR预混试剂。该预混试剂含有特异的抗体修饰Taq DNA聚合酶，能有效检测极低丰度的DNA模板。精心配制的独特PCR缓冲液能有效消除众多PCR抑制剂对PCR的抑制及对荧光信号淬灭的影响，对SNP鉴定有很好的特异性和扩增效率。
产品特点：
1．防弹式基因分型---轻松屏蔽PCR抑制剂对SNP分型的影响。
2．快速反应----对多数实验能够执行快速PCR操作。
3．荧光信号强----强劲的SNP分型仅需少量的引物探针。
4．避免操作失误----添加蓝色指示染料，监控实验添加过程。
试剂盒原理：
本制品适用于水解探针法进行模板的荧光定量PCR和SNP检测，该产品可以克服PCR反应液中的抑制因子，特别是对粗提样本，其表现出高度的抗逆性。适用于植物，动物，以及一些环境样本的粗提液。
2×BaiExact Genotyping PreMix（Probe)中特异的抗体修饰热启动Taq DNA聚合酶，95℃条件下仅需2~5分钟即可激活全部酶活，减少了反应时间，同时极大限度的减少PCR扩增全程中的非特异性扩增，配合精心优化的buffer体系，使该产品对于序列变异的鉴定有很好的特异性和扩增效率。
2×BaiExact Genotyping PreMix（Probe)包含dNTPs，增强剂，稳定剂等以提高产物特异性和反应灵敏度，并包含一种微蓝色的指示染料，该染料对PCR反应以及探针荧光没有任何影响；使操作更加方便，避免大量样本小体系（10μl体系）操作过程中容易产生的加样错误。
试剂盒组成：
储存条件：收到本产品后，请立即置于-20℃避光保存，在该条件下避光可保存2年。从-20℃取出使用时，将冻存的2× BaiExact Genotyping qPCR PreMix（Probe)和50×ROX Reference Dye溶解，然后轻轻颠倒混匀，待溶液完全均一后再行使用。如解冻后没有使用，须彻底混匀后重新冷冻（在解冻过程中盐会出现分层现象，未混匀进行冷冻，盐晶体的析出将会对酶造成损害)。如需一段时间内经常取用，可在2～8℃条件下储存3个月。避免反复多次冻融。
注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。使用时请上下颠倒轻轻混匀，请不要使用振荡器进行混匀，尽量避免出现泡沫，并经瞬时离心后使用。
2．本产品中不含有荧光探针。
3．引物终浓度为300 nM，探针终浓度为200 nM可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。需要进一步优化引物浓度的，可以在100-900 nM范围内调整；需要进一步优化探针浓度的，可以在100-250 nM范围内调整。
4．20 μl反应体系中，基因组DNA模板的使用量一般小于100ng。
操作步骤：
一、建立Real-Time PCR反应体系：
1．溶解2× BaiExact Genotyping PreMix （如果保存在-20℃)，50×ROX Reference Dye，模板，引物、探针和RNase-Free ddH2O，并将所有试剂在室温下平衡并彻底混匀。
2.建议置于冰上进行Real-Time PCR反应液的配制。反应体系如下：
①引物终浓度为0.3 μM可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。扩增效率不高时，可增加PCR反应体系中的引物浓度；发生非特异扩增时，可适当减少PCR反应体系中的引物浓度。需要进一步优化引物浓度的，可以在0.1-0.9 μM范围内调整。
②探针的浓度与使用的Real-Time PCR扩增仪、探针种类、荧光标记物质种类有关，实际使用时请参照仪器说明书，或各荧光探针的具体使用说明进行。通常探针终浓度为0.2 μM可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。需要进一步优化探针浓度的，可以在0.1-0.25 μM范围内调整。
③几种常见仪器的最适ROX Reference Dye浓度如下：
? ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One等：5×（例如：5μl ROX/50μl体系)；
? ABI 7500、7500 Fast；Stratagene Mx3000P、Mx3005P和Mx4000等：1×（例如：1μl ROX/50μl体系)；
? Roche仪器，Bio-Rad仪器，Eppendorf仪器等：无需添加。
3.盖上反应管，轻柔混匀。可短暂离心，确保所有组分均在管底。
4.将反应体系置于荧光定量PCR仪中，开始反应。
二、进行Real time PCR反应：
建议采用两步法PCR反应程序进行反应；若模板量较低等因素导致扩增效果不佳，可使用三步法程序进行PCR反应。
两步法反应程序：
三步法反应程序：
④解链时间的长短与模板的长度和GC含量有关。
⑤使用不同型号仪器进行时间设定时，请按照仪器使用说明书要求进行实验操作，几种常见仪器的时间设定见下表：
? 使用Roche，ABI 7500 Fast，BioRad和Agilent等公司荧光定量PCR仪时请设定在15sec。
? 使用ABI 7900HT/7900HT Fast/ViiA 7/StepOne/StepOnePlus时请设定在20 sec。
? 使用ABI 7000和7300时请设定在31 sec。
? 使用ABI7500时请设定在32 sec。
常见问题：
1．低浓度模板时扩增曲线混乱，荧光强度变弱
2．重现性差
3．NTC可见扩增
4．扩增曲线荧光信号很弱，或扩增曲线呈锯齿状
