2×快速高保真PCR预混反应液

中文名称：

2×快速高保真PCR预混反应液

英文名称：

2×Super HiFi PCR MasterMix

2×快速高保真PCR预混反应液产品规格：

50μl×40次（不含染料)|50μl×200次（不含染料)|50μl×40次（含染料)|50μl×200次（含染料)

发货周期：

1～3天

2×快速高保真PCR预混反应液

本制品为Super HiFi DNA Polymerase的预混Mix形式。Super HiFi DNA Polymerase是通过定向分子进化技术开发得到的新型快速高保真DNA聚合酶，对DNA模板具有超强的亲和力，从而使得聚合酶的延伸速度可达15~30 sec/kb、模板延伸能力可达15kb，并能提高PCR反应的成功率、增加PCR扩增的产物量。此外，Super HiFi DNA Polymerase具有超强的3'~5'外切酶活性（Proofreading活性），保真性约为普通Taq DNA Polymerase的50倍。
本制品为一管式预混Mix形式，内含Super HiFi DNA Polymerase、超纯dNTP、MgCl2、反应缓冲液等PCR反应所需组分，只需加入模板和引物即可进行PCR扩增反应。除此之外，预混Mix中还整合了PCR反应增强系统，不但提高了预混Mix的稳定性，使得聚合酶对PCR反应抑制剂的耐受能力增强，还提高了Super HiFi DNA Polymerase对高GC含量模板的扩增能力，可扩增GC含量高达75%的模板。

本制品的PCR产物为平末端，可加A处理再与T载体连接或直接使用平末端克隆载体进行基因克隆，如我公司零背景快速连接试剂盒（目录号：WH0191）。

产品特点：
·扩增快速：延伸速度可达15~30 sec/kb。
·保真性高：保真性为普通Taq DNA Polymerase的50倍。
·延伸力强：可扩增长至15 kb的DNA片段。
·灵敏度高：模板用量可低至10pg。
·复杂模板：可成功扩增GC含量高达75%的DNA模板。
·操作简便：预混Mix形式，只需加入模板和引物即可进行PCR反应。

下游应用：
DNA的高保真快速扩增，如长片段扩增、高GC含量模板、复杂模板扩增等，基因定点突变、基因组点突变的分析（SNP）等。

扩增模板类型及长片段扩增举例：

质量控制：
经检测无外源核酸酶活性；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。

产品组成：

储存条件:-20℃可保存1年


高PCR扩增成功率：对于不同物种来源的基因组DNA模板、高GC含量的复杂DNA模板、长片段模板等均有较高的扩增效率及成功率。
1：长度1kb；
2：长度2kb；
3：长度4kb；
5：长度8kb；
6：长度10kb；
7：长度15kb；
8：GC含量62%（长度1.5kb)；
9：GC含量75%（长度2kb)；
10：长度2.2kb；
11：长度8kb；
12：长度2.1kb；
13：长度8kb。

操作步骤：
一、PCR反应液的配制：
1．室温融化2×Super HiFi PCR MasterMix，并按下表配置PCR反应体系。
? 注：反应体系配制过程应在冰上进行，所有的试剂在使用前均要充分混匀。

*引物终浓度为0.25μM时可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。扩增效率不高时，可增加PCR反应体系中的引物浓度；适当减少PCR反应体系中的引物浓度则可以增加PCR反应特异性。如有必要，可以在0.2~1.0 μM间进行优化选择。
**模板DNA用量请参照如下（50μl PCR反应体系)：

2．按1中建议模板及引物用量加入模板、引物和ddH2O，混匀后上机进行PCR反应。
二、PCR反应条件：
1．使用2×Super HiFi PCR MasterMix进行扩增反应时，请先使用三步法。
? 注：进行三步法扩增时，按延伸速度按照15~30sec/kb进行设定。对于DNA长度≥6 kb的模板或复杂模板，建议将延伸时间延长至30~60 sec/kb。下述反应程序仅供参考，实际情况下，客户可按照自身情况进行更改和调整。

退火温度为60℃可以在大多数体系中获得良好的扩增结果。PCR反应特异性不高时，可以在55~68℃范围内适当增加退火温度；如果引物Tm值小于63℃，可以将退火温度按Tm值进行设定。
2．当扩增产物出现杂带或弥散时，请尝试两步法或降落PCR（Step down PCR）。

3．结果检测：反应结束后取5 μl反应产物，进行琼脂糖凝胶电泳检测。

常见问题分析：