小鼠组织直接PCR扩增试剂盒

中文名称：

小鼠组织直接PCR扩增试剂盒

英文名称：

Mouse Tissue Direct PCR Kit

小鼠组织直接PCR扩增试剂盒产品规格：

50次|200次

发货周期：

1～3天

小鼠组织直接PCR扩增试剂盒

本试剂盒采用独特的包装体系，包含了快速制备小鼠组织基因组DNA和后续PCR扩增的所有试剂，适用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中一步法提取基因组DNA并用于后续的PCR扩增和检测。整个提取过程不包含匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作，实验操作简便、快捷，而且结果稳定可靠。
本试剂盒提供的2× Direct PCR MasterMix是一种高扩增兼容性的PCR试剂，无需彻底去除蛋白等杂质，便能进行高效特异扩增。该预混Mix包含抗体修饰的Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液、PCR反应增强剂和稳定剂，操作时只需加入粗提模板和引物即可进行后续检测，具有操作简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点，特别适合于高通量的检测筛选。Mix中预混有电泳染料，可在反应结束后直接进行电泳检测，使用方便快捷。PCR产物的3′端带A，可进行TA克隆。

产品特点：
·简单快速：适用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中一步法基因鉴定。
·高特异性：本产品所用Taq酶为抗体修饰热启动酶，具有高效的模板和引物亲和性及扩增特异性，特别适合基因分型和转基因鉴定。
·基因检测：本产品操作简便，结果可靠，特别适合小鼠的高通量分析检测。

储存条件：组织裂解缓冲液Tissue Lysis Buffer和Digestive Enzyme在室温（15-25℃)干燥条件下可保存12个月；2× Direct PCR MasterMix在-20℃条件下可长期保存，多次冻融不会影响活性，如需经常使用，可存放于4℃。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。
1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2．组织裂解缓冲液Tissue Lysis Buffer应放置于室温保存，如放在低温（-20℃或4℃）保存时有沉淀析出，可在37℃水浴中重新溶解沉淀，并摇匀溶液后使用。
3．本产品提供的2×Direct PCR MasterMix为2×母液，使用时需加入模板和引物，并加入灭菌水补足体积，使其浓度为1x即可进行反应。

操作步骤：
1．第一次使用本试剂盒时，请仔细查看组织裂解缓冲液Tissue Lysis Buffer中是否有结晶析出，如有结晶请将该缓冲液于室温充分平衡至结晶完全溶解，或在37℃水浴中重新溶解沉淀摇匀后使用。组织裂解缓冲液溶解后在室温保存。
2．按照下表配方配制组织消化液：

注意：消化液请尽量现用现配，以保证Digestive Enzyme的活性。
3．取少量小鼠组织样品（约5~10mg）于1.5ml的离心管中，加入100 μl组织消化液，确保组织样品完全浸润于组织消化液中，65℃处理30min。期间每隔10 min左右轻弹管底，提高消化效率。
4．消化结束后，瞬时离心，并于95～100℃下处理5 min。
5．PCR扩增反应。取1 μl上清用于PCR反应，参考PCR体系及扩增程序如下：

参考反应体系：
PCR反应体系的建立，25 μl体系如下：

试剂全部加好后，混匀并瞬时离心，将所有试剂收集到管底。

参考反应条件：

*通常引物退火温度比引物的解链温度（Tm)低5℃，具体退火温度设定可根据引物情况进行调整。

结果检测：
反应结束后取5~10 μl反应产物，进行琼脂糖凝胶电泳检测。
注意：举例仅供参考，实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据实际情况设定*反应条件。操作中如发现管壁或管盖上有液体可以瞬时离心将其甩至管底。