第一链cDNA合成试剂盒(去基因组DNA)

中文名称：

第一链cDNA合成试剂盒(去基因组DNA)

英文名称：

BalbScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit gDNA Purge

第一链cDNA合成试剂盒(去基因组DNA)产品规格：

50次|100次

发货周期：

1～3天

第一链cDNA合成试剂盒(去基因组DNA)

??本试剂盒是以mRNA或者总RNA为模板，高效合成第一链cDNA。本试剂盒使用BalbScript Reverse Transcriptase反转录酶（百奥莱博目录号：JN0011），其RNase H活性低于AMV反转录酶，但可耐受42-50℃的温度。试剂盒中含有重组RNA酶抑制剂（百奥莱博目录号：JN0013），可耐受55℃高温，有效防止RNA降解。本制品含有去除基因组的成分gDNA Removal，在以RNA为模板进行cDNA第一链合成时，可以同步去除基因组DNA。反应结束后于85℃加热5秒钟即可失活反转录酶、RNA酶抑制剂和gDNA Removal。
试剂盒组成：

注意事项：
1、用DEPC处理实验用到的所有器材，或者购买已经证明无核酸酶的实验用具，整个实验过程需戴手套并经常更换手套，避免RNA酶的污染。
2、确保所用试剂中无RNA酶污染。
3、试剂盒如不使用，要严格密封保存。在反转录过程中，所有管盖要确保扣严。
4、纯化过的RNA要保证不含有盐，金属离子，乙醇和苯酚，因为以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀法去除痕量污染物。

实验步骤：

第一链cDNA合成:
1、融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
2、按顺序加入下面的反应物

3、可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将模板和引物的混合液轻柔混匀，短暂离心，于65℃条件下孵育5分钟后在冰上冷却。
4、轻柔混匀后离心。
5、如果使用Oligo(dT)18或者基因特异型引物，需在42℃条件下孵育60分钟。如果使用随机六聚体引物，则要先在25℃条件下孵育5分钟后转为42℃孵育60分钟。
6、70℃加热5min终止反应。
反应产物可直接用于PCR反应，如果不立即使用，在-20℃可保存一周左右。如想延长保存时间，建议使用-70℃保存。

第一链cDNA的PCR扩增:
合成的第一链cDNA可直接用于PCR或qPCR。第一链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50 μl的PCR反应体系中，第一链cDNA反应液加入2μl。

储存条件：-20℃

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