高保真DNA聚合酶

中文名称：

高保真DNA聚合酶

英文名称：

Pfu DNA Polymerase

高保真DNA聚合酶产品规格：

100U

发货周期：

1～3天

高保真DNA聚合酶

Pfu DNA Polymerase是经过基因工程改造的，新一代超保真DNA聚合酶，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性，可用于几乎所有PCR反应。其行进性 (processivity)得到了大幅度提升，即使是非常复杂的模板，也能准确快速的完成反应。
本产品中附带的5×Phanta SF反应缓冲液对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg2+ (1×终浓度为2 mM)，可以使用产品中提供的DMSO或MgSO4对反应体系进行优化。另外，产品中附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。

产品特点：
? 保真度是Taq DNA Polymerase的52倍
? 扩增速度是常规聚合酶的4-150倍
? 广泛的模板适应性
? 优化的缓冲体系广泛适用于各种类型模板，便于快速得到理想的扩增结果
? 提供PCR Enhancer以帮助扩增高GC含量的模板
? 提供即用型的预混液，*程度地减少实验步骤

产品组份：
5×SF Buffer(with 10mM MgSO4)：1.25 ml
25 mM MgSO4：1 ml
dNTP Mix(10 mM each)：100 μl
Pfu DNA Polymerase(1 U/μl)：100 μl
5×PCR Enhancer：500 μl
DMSO：100 μl
10×Loading buffer：1.25 ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。
储存条件：-20℃。

质量控制
核酸外切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 oC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。核酸内切酶残留检测：10 U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测1：50 μl PCR体系中加入1U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的8.2 kb条带。
功能检测2：50 μl PCR体系中加入1U本品，以10 ng人基因组DNA为模板扩增30个循环，取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 kb条带。

引物设计注意事项
1）引物3’端*一个碱基*为G或者C；
2）引物3’端*8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。