热启动DNA聚合酶

中文名称：

热启动DNA聚合酶

英文名称：

Hot Start DNA Polymerase

热启动DNA聚合酶产品规格：

250U

发货周期：

1～3天

热启动DNA聚合酶

Hot Start DNA Polymerase(HS DNA Polymerase)是经过化学修饰的热稳定重组型Taq DNA Polymerase，在室温下活性被完全封闭，只有经过95℃加热后活性才被释放，可防止在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增和引物二聚体。与基于抗体的热启动Taq酶相比，化学修饰的Hot Start DNA Polymerase活性封闭更彻底，严谨性更高；与现有化学修饰的热启动Taq酶相比，Hot Start DNA Polymerase的激活时间只需要5分钟，兼容现有的PCR程序。
Hot Start DNA Polymerase的反应缓冲液中的组分、浓度都经过优化，使得引物与模板结合的严谨性提高，从而*程度的减少非特异扩增和引物二聚体，非常适合于从复杂模板(基因组，cDNA)中扩增低拷贝基因。PCR产物3’端带A，可克隆至T载体。另外，产品中提供的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。

产品组分：
10×HS PCR Buffer(with 20 mM MgCl2)：1.25ml
25 mM MgCl2：1ml
dNTP Mix(10 mM each)：200μl
Hot Start DNA Polymerase(5 U/μl)：50μl
5×PCR Enhancer：500μl
10×Loading buffer：1.25ml

活性定义：用活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，74℃ 30分钟内，摄入10 nmol的全核苷酸为酸性不溶物的活性定义为1个活性单位（U）。

质量控制
核酸外切酶残留检测：10U本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 oC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：10U本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50μl体系中，加入2U本品，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：PCR体系中加入1.25U本品，以100 ng人基因组DNA为模板扩增α-1-antitrypsin基因。35个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的360 bp条带。

引物设计注意事项
1）引物3’端*一个碱基*为G或者C；
2）引物3’端*8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

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