2×Long PCR Master Mix(不含染料)

中文名称：

2×Long PCR Master Mix(不含染料)

英文名称：

2×Long PCR Master Mix (No Dye)

2×Long PCR Master Mix(不含染料)产品规格：

1ml

发货周期：

1～3天

2×Long PCR Master Mix(不含染料)

Long PCR Master Mix (No Dye)包含Long Taq DNA Polymerase，dNTP以及优化的缓冲体系，只需加入引物和模板即可进行扩增，大大简化实验的操作步骤，提高了高通量操作和实验结果的重现性。Long Taq DNA Polymerase是Taq DNA Polymerase与一种含有3'→5’外切酶活性（校对活性）的蛋白组成的混合酶，保真度是Taq DNA Polymerase的6倍。配合独特的缓冲体系，Long Taq DNA Polymerase可从人基因组模板中扩增长达15 kb的片段。
Mix中不含有溴酚蓝染料，其中的保护剂使得Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A，可轻松克隆至T载体。

质量控制
核酸外切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg λ-Hind Ⅲ在74 oC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
核酸内切酶残留检测：20 μl本品和0.6 μg Supercoiled pBR322 DNA在74 oC下孵育1小时，DNA的电泳谱带不发生变化。
大肠杆菌残留DNA检测: 50 μl体系中，以ddH2O为模板，扩增E.coil 16s rDNA基因。35个循环后扩增产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，无扩增条带。
功能检测：50 μl体系中，以100 ng人基因组DNA为模板扩增dystrophin基因。30个循环后取10% PCR产物进行1% 琼脂糖凝胶电泳，EB染色，观察到单一的15 Kb条带。

操作注意事项
由于Long Taq DNA Polymerase在室温下也有一定的反应活性，建议在冰上配制PCR反应体系，再置于PCR仪上进行扩增。这样有利于提高扩增的特异性，减少非特异扩增，得到良好的PCR结果。

引物设计注意事项
1）引物3’端*一个碱基*为G或者C；
2）引物3’端*8个碱基应避免出现连续错配；
3）引物3’端尽量避免发夹结构出现；
4）引物的Tm值调整至55℃-65℃之间。
5）引物额外附加序列，即与模板非配对序列，不应参与引物Tm值计算；
6）引物的GC含量控制在40%-60%之间；
7）正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。