柱式细菌DNA提取试剂盒

中文名称：

柱式细菌DNA提取试剂盒

英文名称：

Column Bacterial DNA Isolation Kit

柱式细菌DNA提取试剂盒产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

柱式细菌DNA提取试剂盒

本产品是在百奥莱博在"百无忧"细菌DNA提取试剂盒 基础上开发的柱式升级产品，可以用于绝大多数革氏阳性和阴性细菌基因组DNA的快速提取。
特点：
1. 操作简单，整个过程不到20分钟。
2. 产率一般在5-20μg/mL 过液培养的饱和菌液（10^8～10^9个细胞）。
3. OD260/280一般在1.8以上，可直接用于PCR、酶切、杂交等实验。
4. DNA片段长度一般在40-50 Kb左右。
5. 每次提取可以处理0.1-1.5mL的细菌，也可以使用菌落。
6. 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。
7. 安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。

产品组成：

保存条件：常温(溶菌酶干粉需要4℃或-20℃保存)，有效期一年。

自备试剂：氯仿、自备无菌水

使用方法：
注意：溶液A和溶液B 容易产生沉淀，溶液B 十分粘稠，均需要放置在65℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。

一、对革氏阴性细菌样品，不需用溶菌酶
1. 将0.1-1.5mL过夜培养的菌液转移到1.5mL塑料离心管中， 12,000rpm室温离心1分钟沉淀细菌，弃上清。
2. 加入300uL预热的溶液A 到细菌沉淀中，充分吹打均匀。
3. 再加入150uL预热的溶液B 到离心管中，颠倒数次混匀。此时溶液中可能有白色丝状悬浮物产生。由于溶液B 比较粘稠，可以采取称量方法取用，150μL约等于150-160 mg。也可以将1mL 枪头剪去一截再吸取。
4. 65℃放置3-5分钟。如果室温放置，DNA 产量会降低10-20%。
5. 加入200μl 自备氯仿，震荡混匀10-30 秒，此时溶液将呈乳白色。
6. 12,000rpm 室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5mL 塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。
7. 加入1.5 倍体积(约0. 7mL)的溶液C，颠倒混匀后全部转移到离心吸附柱中，室温放置至少2分钟。
8. 12,000rpm 室温离心1分钟，DNA 将吸附在离心吸附柱的膜上，倒弃收集管中的穿透液。
9. 将0.5mL 通用洗柱液加入离心柱中，12,000rpm 室温离心1分钟，弃穿透液。
10. 重复上步操作一次。
11. 空甩半分钟去除残留液体,将离心吸附柱转移到新的1.5mL 离心管中。
12. 加50-100μl 通用洗脱液，室温放置3-5分钟。
13. 12,000rpm 室温离心1分钟即得DNA 溶液。
14. 由于本产品使用的离心吸附柱吸附DNA的能力较强，可以重复上步操作一次以便得到更多的DNA。
15. 直接取5-10μl 电泳检测DNA，其余放冰箱备用。

二、对革氏阳性细菌样品，需用溶菌酶
1. 将0.1-1.5mL 过夜培养的革氏阳性细菌12,000rpm 室温离心1分钟后, 重悬于0.6mL 溶菌液中（溶菌液配制:30mL 无菌水+600 mg 溶菌酶，配制后*分装成小管并放-20℃长期保存，每次只用一小管)，颠倒混匀5-10 次后放37℃保温至少30分钟(有的革氏阳性菌种可能需更长时间，需要自己根据不同的细菌摸索)。
2. 12,000rpm 室温离心10分钟，小心弃上清。
3. 后续处理接上面的革氏阴性细菌提取步骤中的第2 步。

三、其他注意事项
1. 可以直接使用细菌菌落提取DNA，操作时直接将细菌菌落挑入到溶液A中，后续操作同上。
2. 从单个菌落中提取到的DNA 较少，所以只用30μl 通用洗脱液洗脱。

使用效果：

图注：用本产品提取1.0mL过夜培养的E.coli Tg1细菌，DNA*溶于100μl TE中，取20μl上样。M表示全长的DNA,其余均为提取的样品DNA。

首页 ?|? 关于我们 ?|? 联系我们 ?|? 在线咨询