酵母质粒小量提取试剂盒

中文名称：

酵母质粒小量提取试剂盒

英文名称：

Yeast high purity plasmid small amount rapid extraction kit

酵母质粒小量提取试剂盒产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

酵母质粒小量提取试剂盒

本试剂盒适用于酵母小规模高纯度质粒制备。采用改进SDS-碱裂解法裂解细胞并结合lyticase特异消化酵母细胞壁，能在1小时内从酵母培养液中分离出高纯度质粒DNA。酵母收集后,加入破壁酶去除细胞壁后,然后碱裂法裂解细胞，离心吸附柱内的硅基质膜在高盐、低PH值状态下选择性地结合溶液中的质粒DNA，再通过去蛋白液和漂洗液将杂质和其它细菌成分去除， *低盐、高PH值的洗脱缓冲液将纯净质粒DNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒组份(50次)：
RNaseA(10mg/ml)—————————150μl
Lyticase————————————2500U
溶液YP1—————————————15ml
溶液YP2—————————————15ml
溶液YP3—————————————20ml
去蛋白液PD———————————25ml
漂洗液WB————————————15ml
洗脱缓冲液EB——————————15ml
吸附柱和收集管(2ml)———————50套

试剂盒特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界*公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。 
2.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。获得的质粒产量高、纯度好，可以直接用于酶切、转化、PCR、体外转录、测序等各种分子生物学实验。
酵母质粒小量提取试剂盒注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 溶液YP3和去蛋白液PD中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
3. 通常酵母质粒拷贝数都很低，高拷贝质粒*得率一般为每5 ml 培养物提取1μg左右的质粒。用于下游试验时通常建议使用量为：1-5μl用做PCR 模板;5-10μl 用于转化大肠杆菌,选择高效率的感受态细胞。
4. 得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。OD260值为1相当于大约50μg/ml DNA。电泳可能为单一条带，也可能为2条或者多条DNA条带，这主要是不同程度的超螺旋构象质粒泳动位置不一造成， 与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。本公司产品正常操作情况下基本超螺旋可以超过90%。
5. 用户需要自备Sorbitol buffer( 1M 山梨醇， 0.1M Na2EDTA，14 mMβ-巯基乙醇)。配制方法：在600 ml 去离子水里面溶解182.2 克山梨醇，加入200 ml 0.5 M Na2EDTA (pH 8.0) ，不需要调节PH 值，定容到1L，4℃保存。临用前加0.1%β-巯基乙醇(商品化的β-巯基乙醇摩尔浓度一般为14M)。
6. 菌体浓度检测一般OD600值为1的时候,酿酒酵母细胞是1-2×10^7cells/ml，由于菌种和分光度计不同即使同样细胞数量OD值变化也很大，以上仅供参考。
7. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱质粒应该保存在－20℃。质粒DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以适当稀释。

储存条件：室温，有效期12个月。


本制品别名：高纯度酵母质粒提取试剂盒|高纯度酵母质粒制备试剂盒|
酵母质粒小量提取试剂盒|酵母质粒小量制备试剂盒

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