土壤基因组DNA提取试剂盒

中文名称：

土壤基因组DNA提取试剂盒

英文名称：

Soil genomic DNA Extraction Kit

土壤基因组DNA提取试剂盒产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

土壤基因组DNA提取试剂盒

本公司的土壤DNA提取试剂盒采用独特的腐殖酸去除液(缓冲液R2)能够有效去除腐殖酸；吸附柱CG能能有效去除金属等抑制因子，提纯得到的基因组DNA可直接用于PCR 反应，酶切或定量实验。
试剂盒组份：

准备工作：
1. 准备55℃，70℃水浴；无水乙醇；异丙醇；制冰机；1.5ml离心管；2ml离心管
2. 按照标签所示在漂洗缓冲液WB2中加入无水乙醇，混匀后盖紧瓶盖后室温贮存备用。
3. 每次使用前请检查缓冲液R2，缓冲液R3是否有沉淀生成，如果出现沉淀，37℃温浴至沉淀溶解后再使用。
土壤基因组DNA提取试剂盒标准操作步骤：
如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

1、称0.3-0.5 g土壤置于2ml离心管中，加入0.4 g Glass Beads，再加入780μl 缓冲液R1与100μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5min。
注：对含水量丰富的样品，可以预先离心除去部分水分后再称取样品。缓冲液R2是腐殖酸去除剂，100μl对大部分样品来说足以有效除去腐殖酸等抑制因子。对一些腐殖酸含量特别丰富的土壤， 缓冲液R2的量可以适当增加，但不能超过250μl，否则会严重影响DNA的得率。
2、加入200μl 缓冲液R3(R3如有沉淀37℃水浴完全溶解后再用)，涡旋混匀。 70℃水浴处理10min。期间振荡几次。
注：如果要纯化革兰氏阳性菌的DNA，请在70℃处理完后，再90℃水浴处理2min。
3、12000 rpm(~13000g)离心1分钟，取600μl上清到1.5ml离心管中，加入180μl 缓冲液R4混匀。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量*不超过80%。
4、冰上放置5分钟。12000 rpm(~13000g)离心1分钟。 转移上清到新的1.5ml离心管中。
注：转移上清时确保不要吸取到沉淀，转移的上清量*不超过80%。
5、加入0.7倍上清体积的异丙醇颠倒混匀。12000 rpm(~13000g)离心2分钟。小心地倒掉上清。
注：如果样品中DNA含量很低，加入异丙醇混匀后-20℃放置1小时。
6、加入350μl 缓冲液R5，待沉淀完全溶解后加入300μl无水乙醇，混匀。
注：为加速溶解沉淀，可置样品于55℃水浴中。
7、将上步混合液转移到吸附柱CG中(吸附柱放入收集管中)，12000rpm离心30秒，倒掉滤过液。 
8、向吸附柱CG中加入500μl 漂洗缓冲液WB1，12,000 rpm (~13,000×g ) 离心30 秒，倒掉废液。
9、向吸附柱CG中加入600μl 漂洗缓冲液WB2(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，12,000 rpm (~13000g) 离心30 秒，倒掉废液，吸附柱CG放入收集管中。
10、向吸附柱CG中加入600μl漂洗缓冲液WB2，12,000 rpm (~13000g) 离心30秒，倒掉废液，将吸附柱CG放入收集管中。
11、12,000 rpm(~13000g)离心2分钟，以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。
注：此步骤非常重要，其目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。漂洗液中乙醇的残留会影响后续的酶反应(酶切、PCR等)实验。
12、将吸附柱CG转入一个干净的1.5ml离心管中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50–100μl经70℃水浴预热的洗脱缓冲液EB，室温放置2分钟，12,000 rpm(~13000g)离心2分钟。
注意：
a.洗脱缓冲液体积*不少于50μl，体积过小影响回收效率。
b.洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。
13、DNA产物-20℃保存。

大量操作步骤(针对含微量核酸的样品)
1、称1-5g土壤置于10ml离心管中，加入1g Glass Beads，再加入3ml 缓冲液R1与200μl 缓冲液R2。涡旋器高速震荡3-5分钟。
2、加入600μl 缓冲液R3，涡旋混匀。70℃水浴处理10分钟。期间振荡几次。
3、3000g离心3分钟，转移上清到新的离心管中，加入550μl 缓冲液R4混匀。
4、冰上放置5分钟。8000g离心10分钟。转移上清到新的离心管中。
5、以下按标准操作步骤的第五步继续操作。

DNA浓度及纯度检测：
基因组DNA片段的大小与样品保存时间、操作过程中的剪切力等因素有关。提取的DNA片段可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。可配制0.8-1.0％琼脂糖凝胶，使用λ/HindIII判断基因组的大小，完整的基因组大小应在23kb以上。使用分光光度计检测时， OD260/OD280比值应为1.7–1.9之间，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水洗脱，比值可能偏低，但并不表明DNA纯度不高。

常见问题分析：

储存条件：室温，有效期12个月。