唾液基因组DNA提取试剂盒

中文名称：

唾液基因组DNA提取试剂盒

英文名称：

Saliva DNA Extraction Kit

唾液基因组DNA提取试剂盒产品规格：

50次|200次

发货周期：

1～3天

唾液基因组DNA提取试剂盒

??本试剂盒适合于从新鲜唾液或唾液/保存液混合液中提取基因组DNA。本产品纯化过程不需使用苯酚或氯仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀。优化的缓冲体系使DNA高效特异地结合到硅基质离心吸附柱上，PCR和其他酶促反应的抑制剂可通过两步洗涤步骤被有效去除，*使用低盐缓冲液或水洗脱，即可得到高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。 
试剂盒组成：

自备试剂：无水乙醇

唾液基因组DNA提取试剂盒实验前准备及重要注意事项：
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/9ml)的蛋白酶K 储存液使其溶解，使其浓度为20mg/ml。配制好的蛋白酶K -20℃保存，勿长时间室温放置，以免影响其活性。其他组分可以在干燥、室温(15-25℃)环境下稳定保存一年。如需保存更长时间，可置于2～8℃。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
3、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
4、使用前请检查Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
5、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在第3步中加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)，RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号：WE0225。
6、若要在室温下长时间保存唾液DNA，推荐使用本公司的唾液DNA保存管(货号：WE0402)。

操作步骤：
1、加入唾液样本或唾液/保存液混合液400μl 。
注意：
1)加入保存液的唾液混合物需在提取前50℃水浴1小时或50℃空气温箱2小时。
2)如需要增加样本体积，则倍比增加步骤2-4中的蛋白酶K 、Buffer GL和无水乙醇的体积，步骤5中液体可分多次转入。
2、加入40μl 蛋白酶K 。
3、加入400μl Buffer GL，涡旋震荡充分混匀，56℃水浴15-30分钟。
注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液(货号：WE0225)，涡旋15秒，室温放置2分钟。
4、短暂离心以去除管盖内壁的水珠。加入400μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀。短暂离心。
注意： 
1)加入Buffer GL和无水乙醇后要立即涡旋震荡混匀。
2)加入Buffer GL和无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
3)GL和无水乙醇后可能形成溶胶状产物，此时推荐进行剧烈震荡或涡旋处理。
5、上一个步骤中所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱(Spin Column DM)中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm(～13400 ×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
8、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
9、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空加入50-200μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意： 
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)Buffer GE在65-70℃水浴预热，离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

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