粪便基因组DNA提取试剂盒

中文名称：

粪便基因组DNA提取试剂盒

英文名称：

Stool Genomic DNA Extraction Kit

粪便基因组DNA提取试剂盒产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

粪便基因组DNA提取试剂盒

??本试剂盒适用于从粪便样本中提取总DNA，包括细胞、细菌、寄生虫以及病毒DNA，也适用于含有高浓度PCR反应抑制剂的样本。本品可处理多至300 mg的粪便样本，纯化获得主要为20-30 kb的DNA片段，纯化过程中不需苯酚或氯仿等有毒溶剂，无需乙醇沉淀，可在一小时内获得高纯度的DNA。本试剂盒采用独特的缓冲系统使裂解液中的DNA高效结合到吸附柱上，同时粪便中的蛋白杂质及抑制下游反应的其他有机化合物可流过膜，PCR和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过两步洗涤步骤有效去除，*使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于酶切、PCR、Real-Time PCR、文库构建、Southern Blot、分子标记等下游实验。
试剂盒组成：

实验前准备及重要注意事项：
1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA 片段较小且提取量下降。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明预先在Buffer GW1和GW2中加入无水乙醇。
3、使用前请检查Buffer SL和Buffer GL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer SL和Buffer GL于56℃水浴重新溶解。
4、如果下游实验对RNA污染比较敏感，可以在加入Buffer SL后加入4μl DNase-Free的RNase A(100 mg/ml)， RNase A本试剂盒并未提供，如需要可单独向本公司订购，货号:WE0225S。

粪便基因组DNA提取试剂盒操作步骤：
1、取100-300 mg粪便样本，置于离心管(自备)中。
2、加入1ml Buffer SW，涡旋振荡3-5分钟，使样本均匀分散于溶液中。12000rpm(～13400×g)离心1分钟，弃上清。
3、加入1ml Buffer SL，涡旋振荡3-5分钟，使样本均匀分散于溶液中，65℃水浴20分钟，期间可每隔5分钟涡旋振荡15秒。
注意：如需去除RNA，可在上述步骤完成后，加入4μl浓度为100 mg/ml的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀，室温放置5-10分钟。
4、12000rpm离心3分钟，将上清移至新的离心管(自备)中。
5、向上清液中加等体积Buffer GL，颠倒混匀15-25次，冰上放置5分钟。12000rpm离心5分钟。
注意: 此时液体可能为透明或浑浊状态，均不影响实验。
6、将步骤5中所得上清加入到已装入收集管的吸附柱中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、重复步骤7。
9、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
10、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
11、将吸附柱置于一个新的离心管(自备)中，向吸附柱的中间部位悬空滴加50-100μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时会降低洗脱效率。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)用另外的50-100μl Buffer GE或灭菌水再次洗脱可以增加产量。
4)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤11所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤11；可以增加DNA的终浓度，但可能会减少总产量。如果DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE或灭菌水洗脱。
5)保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。
6)基因组DNA模板中残余的微量PCR抑制物可能对PCR反应产生不良影响，可将DNA稀释2-10倍通常即可解决。

储存条件：室温(15～30℃)。

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