口腔拭子基因组DNA提取试剂盒

中文名称：

口腔拭子基因组DNA提取试剂盒

英文名称：

Swab Genomic DNA Extraction Kit

口腔拭子基因组DNA提取试剂盒产品规格：

50次|200次

发货周期：

1～3天

口腔拭子基因组DNA提取试剂盒

??本试剂盒提供一种简单快速分离纯化口腔拭子样本总DNA的方法。该试剂盒采用可特异性结合DNA的硅基质膜和独特的缓冲系统，高效专一吸附DNA，每个拭子可得到0.5-3.5μg基因组DNA，提取的DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠。适用于酶切、PCR、文库构建、Southern杂交等实验。
试剂盒组成：

口腔拭子基因组DNA提取试剂盒产品特点：
1、采用硅基质膜原理，简单、快速从口腔拭子中提取基因组DNA。
2、提取的基因组DNA片段大、纯度高。
3、单个拭子样本得率达到0.5-3.5μg。

自备试剂：无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项：
1、向蛋白酶K 中加入指定用量(1.25ml/5ml)的蛋白酶K 储存液使其溶解，-20℃保存。配制好的蛋白酶K 勿长时间室温放置，避免反复冻融，以免影响其活性。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
3、使用前若发现Buffer GL有沉淀，请将Buffer GL于56℃水浴溶解。
4、全部离心步骤可在室温下进行。
5、取样：使用口腔拭子在口腔内壁擦拭6次，晾干2小时保存，为确保样本不被食物或饮料污染，取样前30分钟内请勿进食和饮水。

操作步骤：

1．将口腔拭子的棉签用剪刀从杆上剪下，置于2ml的离心管(自备)中，加入400μl Buffer GR。
注意：如需无RNA污染的基因组DNA，可加入4μl浓度为100 mg/ml 的RNase A溶液(货号：WE0225S)，震荡混匀。
2．加入20μl 蛋白酶K 和 400μl Buffer GL，立即涡旋震荡15秒，充分混匀。
注意：加入Buffer GL后立即充分混匀；不可将蛋白酶K 直接加入Buffer GL中使用。
3．56℃放置10分钟，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
4．加入400μl无水乙醇，涡旋震荡充分混匀，短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。
注意：加入无水乙醇后可能会产生白色沉淀，不会影响后续实验。
5．将上步所得溶液和沉淀分两次加入到已装入收集管的吸附柱中，一次最多不超过700μl 。12000rpm(～～13400×g)离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
6．向吸附柱中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7．向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心3分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如需进一步提高DNA纯度，可重复步骤7。
8．12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
9．将吸附柱置于一个新的1.5ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入50μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)若需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。