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液体样本TRIzol试剂
  • 品牌:上海联迈生物工程有限公司
  • 产地:中国/上海
  • 货号:LM-0011
  • 发布日期: 2018-12-27
  • 更新日期: 2024-04-30
产品详请
产地 中国/上海
品牌 上海联迈生物工程有限公司
货号 LM-0011
保存条件 4℃保存
英文名称 TRIzol LS Reagent
保质期 一年

液体样本TRIzol试剂

中文名称:

液体样本TRIzol试剂

英文名称:

TRIzol LS Reagent

产品规格:

100ml

发货周期:

1~3天

液体样本TRIzol试剂

TRIzol LS试剂是一种专门用于从液体样本(如细菌、病毒、酵母、血液、组织悬液)中提取高质量RNA的试剂。与TRIzol Reagent相比,*区别在于其组分浓度,TRIzol LS试剂是一种用于提取液体样本RNA的浓缩试剂,故提取相同量样本所需的用量相对较少。TRIzol LS试剂能够充分裂解细胞,溶解细胞内含物,高效抑制RNA酶活性,从而可保持RNA的完整性。提取过程方便快速,整个操作在一小时内便可以完成。应用TRIzol LS试剂获得的总RNA无蛋白质和DNA污染,可用于Northern Blot、Dot blot、ployA筛选、体外翻译、RNase保护分析和基因克隆等后续分析。
样本量及 RNA 产量:

样本类型样本量产量
人全血250μl3~10μg
白细胞1×10610~20μg
细胞1×1068~15μg
肌肉/脑等组织25mg10~25μg
*组织25mg50~100μg



储存:2-8℃避光保存,可保存2年。
自备试剂:氯仿,异丙醇,70%乙醇(DEPC 水配置),RNase
注意:
1.请勿应用该试剂直接处理大块固体组织,否则会影响 RNA的产量。
2.该试剂含有强变性剂,请勿直接于皮肤接触或吞咽,若接触到皮肤或眼睛请尽快到医院处理。实验时务必穿实验服,戴手套。

液体样本TRIzol试剂操作方法:

一、实验前准备:
RNA 制备的关键是要抑制细胞中的RNA 分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA 分解酶的污染。因此,在实验中必须采取以下措施:戴一次性干净手套;使用RNA 操作专用实验台;在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA 分解酶的污染。
注意事项:
1.尽量使用一次性塑料器皿,若用玻璃器皿,应在使用前用0.1%DEPC 水溶液在37℃处理 12h,然后在120℃高压灭菌 30分钟 以除去残留的DEPC。
2.用于 RNA 实验的试剂,须使用干热灭菌(180℃,60min)或DEPC水处理相关容器,使用的无菌水须用0.1%的DEPC处理后再进行高温高压灭菌。
3.RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用,避免混用后交叉污染

液体样本TRIzol试剂二、实验操作

TRIzol LS使用方法:


液体样本:
全血、血清、病毒液
悬浮细胞、酵母动植物组织贴壁细胞
1.样品预处理粪便等固体样品,可用PBS 重悬样品,并匀浆后,3000rpm离心5分钟, 取上清作为病毒液样品。 其它样品直接使用即可。如样本中细胞含量低,则需要采用离心法沉淀细胞后使用250μl 灭菌水重悬细胞再进行下面操作。将样品转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,其间不断加入液氮,直至研磨成粉末状。每 10 cm2 生长的培养细胞中倒出培养液,用PBS 清洗一次,尽可能移除多余的溶液。
2.加入TRIzol-LS取250μl 液体样品加入到装有 750μl TRIzol-LS的1.5ml EP管中。向250μl液体样品中加入750μl TRIzol-LS。将研磨好的组织加入到装有 750μl TRIzol-LS的1.5ml EP管中。加入750μl TRIzol-LS,使裂解液均匀分布于细胞表面,然后使用移液枪吹打细胞使其脱落并转移至 1.5ml EP管中。
3.裂解样品加入TRIzol-LS 后立即手腕用力上下颠倒至细胞、组织粉末等分散均匀,无块状物。室温静置5分钟,使核 酸蛋白复合物完全分离。
4.加水液体样品不需要再额外加水。加入250μl Rnase-Free H2O 混合均匀,静置 2分钟。
5.加氯仿加入200μl 氯仿,手腕用力振荡 15s,室温放置 2分钟。
6.离心分层13000rpm离心10分钟,吸取600μl无色上清至新的1.5ml EP管中。
7.加异丙醇向上述600μl上清液中加入600μl 异丙醇,手腕用力上下颠倒数次,于-20℃放置 5分钟。
8.离心沉淀总RNA13000rpm离心10分钟,小心倒掉上清,留取底部总RNA沉淀。
9.漂洗总RNA向沉淀中每管加入1ml 70%乙醇,上下颠倒数次,13000rpm离心5分钟,小心倒掉上清,留取底部RNA沉淀。
10.重复漂洗一次重复步骤9再洗涤一次。
11.挥发残留乙醇倒掉洗液,再次短离心10s 后,用10μl Tip 头吸干剩余的洗液,置于室温使乙醇挥发干净(~20分钟)。
12.溶解总RNA每管加入20~100μl TE Buffer或Rnase-Free H2O溶解总RNA



常见问题分析:
1.抽提率低。
? 可能原因:
? a. 样品裂解或匀浆处理不彻底;
? b. RNA 沉淀未完全溶解。
2.A260/A280<1.65。
? 可能原因:
? a. 检测吸光度时,RNA 样品没有溶于水,而溶于了TE中;
? b.样品匀浆时加的组织量过多;
? c.分层后,吸取上清液不足 500μl;
? d.吸取水相时混入了有机相。
3.DNA 污染过多。
? 可能原因:
? a. 样品匀浆时加的试剂量太少或组织量过多;
? b. 样品中含有有机溶剂。
? 解决方法:使用该试剂通常基因组DNA 污染含量<0.1ng/μl,如需要彻底去除DNA的污染,请使用Rnase-Free DNase I(货号:A3001)消化去除基因组DNA 污染。如使用cDNA 第一链反转录试剂盒(含基因组去除剂)(货号:MT0015)则无需提前消化去除基因组DNA 污染,该试剂盒中包含了去除基因组DNA 污染的试剂。


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