血清/血浆microRNA提取试剂盒

中文名称：

血清/血浆microRNA提取试剂盒

英文名称：

microRNA Extraction Kit From Blood

产品规格：

25T|100T

发货周期：

1～3天

血清/血浆microRNA提取试剂盒

血清血浆microRNA(miRNA)含量较组织细胞或外周血低，市面上现有的试剂盒提取血清血浆小RNA的得率普遍较低，因此很难用于后续的定量检测。百奥莱博血清血浆miRNA提取试剂盒通过一步上柱即可获得高纯度miRNA，可在10 min左右完成小RNA的提取，提取小RNA（<200 nt）操作步骤最简单、重复性好、小RNA产率高。使用该试剂盒提取的小RNA（Small RNA）中，长度在15～200nt范围的RNA在95%以上，基本不含有大RNA和DNA，可直接用于后续的反转录、Northern 杂交、测序等应用。

产品组成：

血清/血浆microRNA提取试剂盒
储存：室温可保存2年。
自备试剂：异丙醇、乙醇、75%异丙醇、2ml EP管
注意：Serum/Plasma miRNA Reagent溶液中含有胍盐，其具有强烈的腐蚀性，试验时请务必佩戴防护眼镜、手套、口罩等防护措施，如有皮肤接触请立即用大量清水冲洗，再另行就医。

操作方法：
1．向1.5ml EP管中加入600μl Serum/Plasma miRNAReagent。将 500μl 血清或血浆样本加入到上述600μl miRNA Reagent A中，漩涡 30s 混合均匀。
2．13000rpm离心5分钟，将上清约 1ml 倒入到新的2ml EP管中。加入1ml 异丙醇，上下颠倒混合均匀。
3．将上述溶液分三次倒入到吸附柱中（每次约 700μl），13000rpm离心15s，倒掉过柱液。
4．向吸附柱中加入700μl 75%异丙醇洗涤一次，13000rpm离心15s，倒掉过滤液。
5．向吸附柱中加入500μl无水乙醇洗涤一次，13000rpm离心15s，倒掉过滤液。
6．吸附柱 13000rpm 空离心2分钟，去掉残留的乙醇。
7．将吸附柱放入到新 1.5ml EP管中，室温放置 2分钟，使残留乙醇挥发。在吸附柱滤芯上加入30μl Rnase-Free TEBuffer，室温静置 2分钟，13000rpm离心2分钟，洗脱产物即为提取的miRNA。（通常取10μl该产物，即可使用百奥莱博血清血浆专用TaqMan miRNA RT kit 进行反转录反应，货号：MT0007）。


图例1：不同血清体积对定量PCR的影响，以hsa-miR-16 qPCR为例，反转录应用血清血浆TaqMan miRNA反转录试剂盒（MT0007），定量PCR试剂盒用MTT01511。

图例2：应用该血清血浆miRNA提取试剂盒（MT0003）从500μl的血清样本中获得小RNA，血清血浆TaqMan miRNA反转录试剂盒（MT0007）进行反转录，然后用TaqMan miRNA定量试剂盒分别检测不同的8种miRNA表达。
血清/血浆microRNA提取试剂盒常见问题：
1．由于血清血浆中的miRNA含量极低，提取的miRNA浓度通常在10 ng/μl 以下，因此难以用常规的NanoDrop 测量浓度，建议直接使用10μl 进行下游反转录。由于本试剂盒提取的是小 RNA，该浓度下的miRNA Copy 数足以进行下游检测。
2．由于血清血浆中 miRNA的含量低，为了获得更可靠的实验数据，建议使用特异性和灵敏度更好的TaqMan 探针法进行 miRNA的下游检测。本试剂盒提取的miRNA 并不限于其它检测方法和用途，包括 SYBR Green 法检测、二代测序、芯片等检测领域。
3．百奥莱博的MT0007 血清血浆 TaqMan miRNA 反转录试剂盒为血清血浆专用，不可用于细胞和组织的miRNA 检测实验。使用MT0007获得的反转录产物仅可使用本公司的TaqMan miRNA qPCR 试剂盒（货号：MTTxxxxx）。在使用MT0007 反转录条件下，应用货号为 MTT01511 检测内源hsa-miR-16， Ct 值通常在24左右。