RNA提取试剂

中文名称：

RNA提取试剂

英文名称：

RNA Extraction Reagent

产品规格：

100ml

发货周期：

1～3天

RNA提取试剂

本试剂是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，可以提取细菌、植物、动物组织和细胞以及新鲜血液的总RNA。提取的总RNA可用于Northern blot、RT-PCR、Dot blot、RNase保护分析等分子生物学实验。
产品特点：
1 分相明显：本试剂为粉红色，便于氯仿分相后区分水相和有机相。
2 结果可靠：该试剂含有强烈抑制RNase活性的物质，可靠保护RNA不降解。
3 价廉物美：其提取效果与国外进口产品相媲美，价格却低于它的三分之一。

自备试剂及耗材：
氯仿、异丙醇、75%乙醇(用RNase-free 水配制)、RNase-free的水、RNase-free的耗材(Tip头，离心管等)。

RNA提取试剂操作步骤：

1、匀浆处理
组织中提取总RNA：
a.植物组织：植物叶片直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨成粉末，每50-100mg植物叶片加入1ml RNA 提取试剂。
b.动物组织：按10-30mg组织加入1ml RNA 提取试剂，用电动匀浆器或者一次性研磨杵充分匀浆。
培养细胞中提取总RNA：
a.贴壁细胞：无须胰酶消化，可直接用RNA 提取试剂进行裂解，每10cm2培养面积加1mlRNA 提取试剂。
b.悬浮细胞：可直接离心收集、裂解，每1ml RNA 提取试剂可裂解5×106动物或酵母细胞，或107细菌细胞。
血液中提取总RNA：
直接取新鲜的血液，加入3 倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，9,000 g离心1分钟。彻底吸弃上清，收集白细胞沉淀。每100-200μl血液收集的白细胞沉淀加入1ml RNA提取试剂。

2、分层(Phase Separation)
根据样品，选择使用方法A或者方法B。如果不确定，则使用方法 B。
A、(细胞，血液，一般动物组织) 
室温静置5 分钟，再按照1 ml RNA 提取试剂使用200μl的比例加入氯仿，用力颠倒离心管以混匀；室温静置3 -5 分钟使之分层后，4℃ 12000g 离心15
分钟。
B、(植物，脂肪及*等某些杂质含量较高的样品)
室温静置5 分钟后，4℃条件下12000 g 离心10 分钟，将上清移入另外一个离心管中。再按照1 ml RNA提取试剂使用200μl 的比例加入氯仿，用力颠倒离心管以混匀。室温静置2 - 5 分钟使之分层后，4℃条件下12000 g 离心15 分钟。
RNA提取试剂注意：
·4℃ 离心对于降低基因组DNA 的污染是很重要的。
·杂质含量高的样品一定要使用2-B 操作。2-B 操作不仅可以将大部分杂质离心去除，也可以将大片段的基因组
DNA 离心去除，方便加入氯仿后的分层，不过，如果想同时抽提总RNA 和基因组DNA，则使用2-A 操作。
·加入氯仿后的混匀是非常重要的，否则静止分相易出现分相倒置，即水相在离心管下部而有机相在上部。不推荐振荡混匀，而推荐直接用手混匀：将管底斜向朝上，手斜向快速摇动，使体系成粉色乳状。

3、RNA沉淀(RNA Precipitation)
小心将上层水相(通常可吸取550μl)移至另外一个离心管中，再加入等体积冰冷的异丙醇混匀，室温放置10 - 20 分钟，4℃12000g 离心10min，弃上清，RNA沉淀于管底。
注意：
·中间层和红色下层置于 4℃ 保存，以便接下去抽提基因组DNA。
·用冰冷的异丙醇能更迅速的沉降RNA。
·取上层水相时要特别小心，*不要吸入白色中间层及红色下层。移取水相时要使用小体积移液器：200μl 移液器，Tip 的尖嘴要贴在管壁，慢慢松手吸出液体。
·对于脂肪类组织，包括脑组织，在上清的最上层为脂肪，取上清时不要吸入，必要时用等体积氯仿对上清再抽提一次。
·如果是杂质含量高的样品，强烈建议将此步操作改为：在上清中加入一半体积的异丙醇，混匀后，再加入一半 (指上清) 体积的RNA 沉淀试剂(1.2M NaCl，0.8M 柠檬酸钠)。再混匀后，室温放置10 – 20 分钟。
·弃上清后，将离心管置于离心机中离心数秒，再用移液器将残留液体小心吸出。这是最彻底的去除上清的方法，比倒掉上清后再将离心管倒扣在吸水纸上的方·法可靠得多。如果是杂质含量高的样品，强烈建议增加此步操作。如果肉眼看不见沉淀，则不要用移液器吸。

4、RNA漂洗(RNA Wash)
a.RNA 沉淀中加入1ml 75%乙醇(用RNase-free 水配制)，温和振荡离心管，悬浮沉淀。每1ml RNA提取试剂加入1ml 75％乙醇。
b.4℃ 7,500 g离心5min，弃上清。
注：转速不要高于7,500g，否则得到的RNA不易溶解。
c.短暂快速离心，用移液器小心吸弃上清，注意不要吸弃沉淀。室温放置1-2分钟晾干沉淀。
注：RNA样品不要过于干燥，否则很难溶解。

5、溶解RNA(Redissolving the RNA)
根据需要，沉淀中加入适量(一般可加50-100μl)RNase-free 水，轻弹管壁，以充分溶解RNA，-70℃保存。

储存条件：2～8℃，避光，有效期12个月。