DNA消化试剂盒(DNase I)

中文名称：

DNA消化试剂盒(DNase I)

英文名称：

DNA digestion kit

产品规格：

1500U

发货周期：

1～3天

DNA消化试剂盒(DNase I)

Dnase I中文名称为脱氧核糖核酸酶I，是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物，5'端为磷酸基团，3'端为羟基。DNase I活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。
经过本试剂盒独特的反应液消化后不需要繁琐的苯酚/氯仿抽提灭活，可直接用于反转录反应，使用起来非常快速方便。

活性单位：37℃ 10分钟内，将能够完全降解1μg pBR322 质粒DNA 所需的酶量定义为1 个活性单位。
DNA消化试剂盒(DNase I)来源：大肠杆菌表达的31kd 重组蛋白。
酶贮存缓冲液：50 mM Tris-HCl (pH7.5)，10 mM CaCl2，50% (v/v)glycerol。
10×DNase Buffer：100 mM Tris-HCl (pH7.5 at 25℃)，25 mM MgCl2，1 mM CaCl2。
纯度：不含其它DNA 内切酶和外切酶，不含RNA 酶。
适用范围：制备不含DNA的RNA样品； RT-PCR反应前RNA 样品中去除基因组DNA 等可能的DNA污染；体外T7,T3,SP6等RNAPolymerases催化的RNA 转录后去除DNA模板；DNase I footprinting 研究DNA-蛋白质相互作用；缺口平移(nick translatioin)；产生DNA 随机片断文库；细胞凋亡TUNEL 检测中部分剪切基因组DNA 作为阳性对照。
DNA消化试剂盒(DNase I)反应体系与条件：
1.在RNAse free 管里面加入以下成分
RNA：＜3μg (＜8μl)
10×DNase Buffer：1μl
DNase I：1μl
RNase free water：Up to 10μl
2. 37℃孵育30分钟。
3. 加1μl EDTA Stopper。
4. 65℃孵育10 分钟，灭活DNase I。
4. 取适量或者全部10μl 的处理过的RNA 直接用于反转录。

注意事项：
每μl DNase I 最多处理不超过3μg RNA。如果需要RNA 较多，需要根据RNA 的处理量按比例放大DNase I、10×DNase Buffer 使用量和反应体积。如果处理后需要得到纯净RNA，可以使用RNA 清洁纯化试剂盒在第2 步后（37℃孵育30 分钟后）直接清洁纯化（不需要加EDTA Stopper 和65℃孵育10分钟的步骤了）。