微量样品RNA提取试剂盒

中文名称：

微量样品RNA提取试剂盒

英文名称：

Total RNA Extraction Kit From a small amount of sample

产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

微量样品RNA提取试剂盒

本试剂盒最小处理量可以处理10个以上的组织细胞。本试剂盒是在无苯酚、氯仿RNA快速提取技术基础上，采用基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于PCR、荧光定量PCR等实验。独特的裂解液迅速裂解微量样品的细胞和灭活细胞RNA酶，然后裂解混合物通过一个基因组DNA清除柱，基因组DNA被清除而RNA穿透滤过。滤过的RNA用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于特制离心柱内硅基质膜，再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤, 去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物，蛋白等杂质去除， *低盐的RNase free H20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
试剂盒组份：
裂解液RLT Plus—————————20 ml
去蛋白液RW1———————————40ml
漂洗液RW————————————10ml
RNase-free H2O—————————10ml
70%乙醇————————————10ml RNase-free H2O
Carrier RNA——————————310μg
基因组DNA清除柱和收集管————50套
RNA吸附柱和收集管———————50套
微量研磨杵———————————3根

储存条件：室温，有效期半年。(Carrier RNA需-20℃保存)
微量样品RNA提取试剂盒产品特点：
1.完全不使用有毒的苯酚，氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。 
2.快速，简捷，单个样品操作一般可在30分钟内完成。 
3.独特研发成功基因组DNA清除柱技术确保有效清除gDNA残留，得到的RNA不需要DNase消化，可直接用于PCR、荧光定量PCR等实验。 
4.多次柱漂洗确保高纯度，OD260/OD280典型的比值达1.9～2.0，基本无DNA残留,可用于RT-PCR，Northern-blot和各种实验。
微量样品RNA提取试剂盒注意事项：
注意事项
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 样品处理量*不要超过基因组吸附柱和和RNA吸附柱处理能力，否则造成DNA残留或者产量降低。如细胞处理量不超过5×10^5，组织不超过5mg。
3. 一般本试剂盒最小处理量可以处理10个以上的组织细胞。
4. 裂解液RLT Plus 和去蛋白液RW1中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。
5. Carrier RNA 储存液的配制：在第一次使用Carrier RNA 时，将Carrier RNA（310μg）溶解在1 ml RNase-free H2O 中，将溶液分装后储存于-20℃，此时该溶液的浓度为310 μg/ m（l 310 ng/μl）；该储存液应避免反复冻融，冻融次数不能超过3 次。（当处理的细胞量小于5000 个或者处理组织量小于10μg时，请在裂解液中加入20ng Carrier RNA。）
6. Carrier RNA 工作溶液的配制（以配制10 次用量为例）：将5μl Carrier RNA储存溶液加入34μl 裂解液RL 中，用移液器混匀，将混匀后的溶液6μl 加入54μl 裂解液RL 中， 此时Carrier RNA 终浓度为4 ng/μl，取5μl 终浓度为4 ng/μl 的Carrier RNA 加入裂解液中。
7. 预防RNase 污染，应注意以下几方面：
1) 经常更换新手套。因为皮肤经常带有细菌，可能导致RNase 污染。
2) 使用无RNase 的塑料制品和枪头避免交叉污染。
3) RNA 在裂解液RLT Plus 中时不会被RNase 降解。但提取后继续处理过程中应使用不含RNase 的塑料和玻璃器皿。玻璃器皿可在150℃烘烤4 小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH 中浸泡10 分钟，然后用水彻底清洗，再灭菌，即可去除RNase。
4) 配制溶液应使用无RNase 的水。（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC 至终浓度0.1%( v/v)，37℃放置过夜，高压灭菌。）
8. 关于DNA 的微量残留：
一般说来任何总RNA 提取试剂在提取过程中无法完全避免DNA 的微量残留（DNase 消化也无法做到100%无残留），本试剂盒由于采取了本公司独特的缓冲体系和基因组DNA 清除柱技术，绝大多数DNA 已经被清除，不需要DNase消化，可直接用于反转录PCR和荧光定量PCR。个别特殊情况如DNA 含量过于丰富造成残留或者要进行严格的mRNA 表达量分析荧光定量PCR，我们建议在进行模板和引物的选择时：
1) 选用跨内含子的引物,以穿过mRNA 中的连接区,这样DNA 就不能作为模板参与扩增反应。
2) 选择基因组DNA 和cDNA 上扩增的产物大小不一样的引物对。
3) 将RNA 提取物用RNase-free 的DNase I 处理以提高效果。本试剂盒还可以用于DNase I 处理后的RNA 清洁(cleanup),请联系我们索取具体操作说明书。
4) 在步骤去蛋白液RW1 漂洗前，直接在吸附柱 上进行DNase I 处理。请联系我们索取具体操作说明书。

本制品别名：少量样品RNA提取试剂盒|*样品RNA提取试剂盒

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