DNA/RNA提取试剂盒

中文名称：

DNA/RNA提取试剂盒

英文名称：

NuPure DNA/RNA Extraction Kit

产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

DNA/RNA提取试剂盒

??本试剂盒可用于从同一细胞或组织样本中同时纯化基因组DNA和总RNA。由于不需要将样本分成两份用于不同的纯化步骤，该试剂盒可*限度的回收DNA和RNA。纯化的DNA和RNA被单独洗脱并可直接用于各种下游实验。本试剂盒中不包含苯酚和氯仿等有毒物质，无需乙醇沉淀，操作简单、快捷。基因组DNA可用于PCR、Real-time PCR、Southern Blot、 Dot Blot、 比较基因组杂交(CGH)、 基因分析和SNP分析； 总RNA可用于RT-PCR、 Real-time RT-PCR、cDNA的合成、Northern Blot、Dot Blot等分析。
试剂盒组成：

自备试剂：β-巯基乙醇(新开封或提取RNA专用)、70%乙醇(用无RNase的水配制)、无水乙醇。
DNA/RNA提取试剂盒实验前准备及重要注意事项：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
① 使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
② 玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M的NaOH中浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。
③ 配制溶液应使用RNase-Free Water。
④ 操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融，否则影响提取DNA和RNA的质量。样品在Buffer RL中，可于-70℃保存一个月。
3、Buffer RL在使用前请加入β-巯基乙醇，1ml Buffer RL加10μl β-巯基乙醇。加入β-巯基乙醇的Buffer RL室温可保存1个月。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer RW2、Buffer GW1和Buffer GW2中加入无水乙醇。
5、使用前请检查Buffer RL是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请于56℃水浴重新溶解。
6、所有离心步骤均使用台式离心机，室温下进行。

操作步骤：
1、材料处理
① 贴壁培养的细胞应先处理为细胞悬液(*提取量为107个细胞), 收集细胞，弃尽培养液，加入600μl Buffer RL(用前检查是否加入β-巯基乙醇)，反复吹打使其充分裂解。
注意：一定要弃尽培养液，否则影响裂解和后续的核酸纯化步骤。
② 取不大于30 mg的动物组织，液氮研磨成细粉末，加入600μl Buffer RL(用前检查是否加入β-巯基乙醇)，或直接加入600μl Buffer RL(用前检查是否加入β-巯基乙醇)，匀浆处理。
注意：匀浆要充分，否则影响RNA产量。
2、将上步所得溶液12000rpm(～～13400×g)离心3-5分钟，小心的将上清加入到已装入收集管的吸附柱DM中，12000rpm离心30-60 秒，收集滤液。将吸附柱DM放在一个新的收集管中，室温或4℃放置，待提DNA。
注意：确保吸附柱DM上没有液体残留，如果有必要可以重复离心，直至所有的液体通过吸附柱DM的膜。
DNA/RNA提取试剂盒总RNA提取
3、向步骤2所得滤液中加入1倍体积的70%乙醇(无RNase的水配制)，混匀。
4、将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱RM中，若一次不能全部加完溶液，可分次转入。12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
5、向吸附柱RM中加入700μl Buffer RW1, 12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
6、向吸附柱RM中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇),12000rpm离心20秒, 倒掉收集管中的废液，将吸附柱RM重新放回收集管中。
7、重复步骤6。
8、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱RM置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：此步骤目的是去除吸附柱RM中残余的乙醇，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
9、将吸附柱RM置于一个新的无RNase1.5ml离心管中，向吸附柱RM的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
① RNase-Free Wate体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
② 如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤9。
③ 如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤9。

基因组DNA提取
10、向吸附柱DM中加入500μl Buffer GW1(使用前检查是否加入无水乙醇), 12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱DM放收集管中。
11、向吸附柱DM中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇), 12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱DM放回收集管中。
12、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱DM置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱DM中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR等)。
13、将吸附柱DM置于一个新的无RNase 1.5ml离心管中，向吸附柱DM的中间部位加入100μl Buffer GE，室温放置2-5分钟，12000rpm离心2分钟，收集DNA溶液，-20℃保存DNA。
注意：
① Buffer GE的体积不应小于100μl，体积过小影响回收率。
② 如果要提高DNA的产量，将100μl新的Buffer GE加至吸附柱上，重复步骤13。
③ 如果要提高DNA浓度，可以将步骤15所得的DNA洗脱液重新加至吸附柱上，重复步骤13。

储存条件：室温(15～30℃)