超纯RNA提取试剂盒(DNase I)

产品货号：

WE0193

中文名称：

超纯RNA提取试剂盒(DNase I)

英文名称：

SuperPure RNA Extraction Kit(DNase I)

产品规格：

50次

发货周期：

1～3天

超纯RNA提取试剂盒(DNase I)

??本试剂盒是基于TRIzon改进后的柱式总RNA提取试剂盒，本制品可以从动物组织、植物材料、各种微生物及培养细胞等样品中提取总RNA。首先裂解液充分裂解并匀质化样本，在特有的高盐状态下，RNA特异性地与硅基质结合，在极大程度减少了蛋白污染的同时有效去除了有机溶剂的污染，得到的RNA纯度更好，质量更高。本产品可从各细胞或组织中快速提取总RNA，每次可处理 30-50 mg组织或 5×106 细胞，可同时处理多个不同样品。如果是对微量DN非常敏感的RNA实验，残留的DNA可利用无RNase的DNase在柱上进行消化去除，提取后的RNA可直接应用于RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、体外翻译等实验。
试剂盒组成：

保存条件：DNase I及10×Reaction Buffer -20℃保存，TRIzon Reagent 2～8℃避光保存，其它组分室温(15～30℃)。

超纯RNA提取试剂盒(DNase I)自备试剂：氯仿(新开封或提取RNA专用)、70%乙醇(无RNase水配制)、无水乙醇。

实验前准备及重要注意事项：
1、预防RNase污染，应注意以下几方面：
1)使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。
2)配制溶液应使用无RNase的水。
3)操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。
2、样品应避免反复冻融，否则影响RNA提取得率和质量。
3、使用前若发现TRIzon Reagent有沉淀，可置于56℃水浴几分钟，即可溶解。
4、第一次使用前应按照试剂瓶标签说明在Buffer RW2中加入无水乙醇。
5、所有离心步骤若无特殊说明均在室温下进行，且所有操作步骤动作要迅速。

超纯RNA提取试剂盒(DNase I)操作步骤：
1、样品处理
① 组织：30-50 mg组织在液氮中充分研磨后加入1ml TRIzon Reagent，或在组织样品中加入1ml TRIzon Reagent后匀浆处理。
注意：样品体积不超过TRIzon Reagent体积的10%。
② 单层培养细胞：吸去培养液，加入适量 ，每10cm2加入1ml TRIzon Reagent。
③ 细胞悬液：离心收集细胞。每5×106细胞加入1ml TRIzon Reagent。
2、样品中加入TRIzon Reagent后反复吹打几次，使样本充分裂解。室温放置5分钟，使蛋白核酸复合物完全分离。
3、以每1ml TRIzon Reagent加入200μl氯仿的比例加入氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置2分钟。
4、4℃ 12000rpm(~～13400×g)离心10分钟，此时样品分为三层：红色有机相，中间层和上层无色水相，RNA主要在上层水相中，将上层水相移到一个新的RNase-Free离心管(自备)中。
5、在得到的水相溶液中加入等体积的70%乙醇(无RNase水配制)，颠倒混匀。
6、将上步所得溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱中。若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、配制DNase I 混合液：取52μl RNase-Free Water，向其中加入8μl 10×Reaction Buffer和20μl DNase I(1 U/μl)，混匀， 配制成终体积为80μl的反应液。
9、向吸附柱中直接加入80μl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。
10、向吸附柱中加入350μl Buffer RW1，12000rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重新放回收集管中。
11、向吸附柱中加入500μl Buffer RW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心20秒，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
12、重复步骤11。
13、12000rpm离心2 分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温数分钟，彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
14、将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位加入30-50μl RNase-Free Water，室温放置1分钟，12000rpm离心1分钟，收集RNA溶液，-70℃保存RNA，防止降解。
注意：
1)RNase-Free Wate体积不应小于30μl，体积过小影响回收率。
2)如果要提高RNA的产量，可用30-50μl新的RNase-Free Water重复步骤14。
3)如果要提高RNA浓度，可将得到的溶液重新加入到吸附柱中，重复步骤14。

储存条件：室温(15～30℃)。