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小鼠VEGF试剂盒;血管内皮细胞生长因子ELISA试剂盒
起批量( 价格
≥1 ¥1680元/盒
  • 供货能力:1000
  • 最低订购量:1盒
  • 可销售总数量:1000盒
  • 建议零销价:1680元/盒
  • 发布日期: 2018-12-18
  • 更新日期: 2020-10-16
产品详细说明
品牌: 联迈生物 产地: 国产/进口
样本: 血清、血浆、尿液、细胞上清液等 标记物: 辣根过氧化物酶标记
应用: 科研使用 检测方法: 酶联免疫法
检测限: 15.6pg/ml~1000pg/ml 数量: 88
货号: LM-ZN2803

小鼠VEGF试剂盒;血管内皮细胞生长因子ELISA试剂盒检测原理

本试剂盒采用夹心法酶联免疫吸附法,用于体外定量分析小鼠血清、血浆、细胞裂解液、细胞培养上清中VEGF的含量。预先包被的抗体和检测相抗体都是VEGF亲和纯化多克隆抗体。检测相抗体经生物素标记。样品和生物素标记抗体先后加入酶标板孔反应后,PBS或TBS洗涤。随后加入过氧化物酶标记的亲和素反应;经过PBS或TBS的彻底洗涤后用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的VEGF呈正相关。

VEGF是最重要的血管生长因子之一。二个亚单位由二硫键连接,组成分子量46-48KDa的糖蛋白质。VEGF有多个亚型。根据其亚单位所含氨基酸数量的不同,分别命名为VEGF121,VEGF144,VEGF165,VEGF189和VEGF206等。本试剂盒所用的标准品为重组小鼠VEGF164,二聚体分子量42KDa。

检测指标:VEGF
检测范围:15.6pg/ml~1000pg/ml
特异性:系统和其它细胞因子无交叉反应
敏感性:<0.5pg/ml

产品组成:

组分规格数量
预包被抗小鼠VEGF抗体的96孔板96T1板
重组小鼠VEGF标准品(冻干)10ng/管2管
生物素标记抗小鼠VEGF(100X)130μl1管
亲和素-过氧化物酶复合物(ABC)(100X)130μl1管
样品稀释液30ml1瓶
抗体稀释液12ml1瓶
ABC稀释液12ml1瓶
TMB显色液10ml1瓶
TMB终止液10ml1瓶
洗涤缓冲液(25X)20ml1瓶
封板膜
4张



储存条件:2-8℃(频繁使用时),-20℃(长时间不用时)
有效期: 6个月(4℃);12个月(-20℃)

参考标准曲线数据:(取自某一批次质检数据,仅供参考,用户需要自己建立标准曲线)

浓度(pg/ml)015.631.262.51252505001000
OD值0.0080.0850.1650.3070.5921.1221.9342.432

 

 

小鼠VEGF试剂盒;血管内皮细胞生长因子ELISA试剂盒用于检测未知抗原的双抗体夹心法:   

1. 在包被溶液中稀释纯化的包被抗体(一般0.5-4μg/ml),将该稀释后的包被抗体100μl/孔加入到酶标板内。

2. 用封板膜将板封好防止蒸发,在室温(或4℃)孵育过夜。

3. 吸干每一板孔并加洗液洗涤,重复3次。使用洗瓶、多道移液器、多功能分装器或洗板几,每孔加400μl彻底洗涤。规范的操作要求每步完全移出孔中的液体。*一步,将板中液体移出并将板子在干净的纸巾上吸附。

4. 200-300μl/孔封闭液封板,室温至少孵育1小时。

5. 重复步骤3,可利用真空泵干燥板子。加入干燥剂并封板,至少在4-8℃可贮存2个月。

6. 每孔加100μl适当稀释的标准品和标本,轻轻敲打板子1分钟。贴上封板膜,室温孵育2小时。

7. 重复步骤3

8.每孔加100μl经过适当稀释的生物素化的检测抗体,贴上新的封板膜,室温孵育2小时.

 

9. 重复步骤3

10. 每孔加100μl经过适当稀释的Avidin-HRPStreptavidin-HRP,也可加其它种类预先优化物11. 重复步骤3

12. 每孔加100μl底物溶液,避光,室温孵育5-30分钟进行显色反应

13. 每孔加50μl终止液,轻轻振荡板子确保充分混匀

14. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以+”、“-”号表示。也可测OD值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔OD值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。

方法二 用于检测未知抗体的间接法:

用包被缓冲液将已知抗原稀释至110μgml

每孔加0.1ml4℃过夜。次日洗涤3次。

加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔中,37℃孵育1小时,洗涤。(同时做空白、阴性及阳性孔对照)于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml

37℃孵育30-60分钟,洗涤,*一遍用DDW洗涤。

其余步骤同“双抗体夹心法”的456

小鼠VEGF试剂盒;血管内皮细胞生长因子ELISA试剂盒重复性

板内,板间变异系数均<10%

典型数据

由于实验操作条件的不同(如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等),标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考,实验者需根据自己的实验建立标准曲线。

精密度

板内精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在1块板子上检测20次。

板间精密度:低浓度样本,中浓度样本和高浓度样本分别在3块板子上检测20次。

回收率

分别往5个不同样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围和平均回收率。

小鼠VEGF试剂盒;血管内皮细胞生长因子ELISA试剂盒线性

分别往5个样本中添加已知浓度的目标蛋白,做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。将5个样本分别稀释2倍,4倍,8倍,16倍做回收实验,得出回收率范围及平均回收率。

试剂盒组成及保存

未拆封的试剂盒可在4℃保存一周;如果一周以后才使用试剂盒,请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。

说明:所有试剂瓶盖须旋紧以防止蒸发和微生物的污染。

试剂体积以实际发货版说明书为准。相关试剂在分装时会比标签上标明的体积稍多一些,请在使用时量取而非直接倒出。

试验所需自备物品

1. 酶标仪(450nm波长滤光片)

2. 高精度移液器,EP管及一次性吸头:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL

3. 37℃恒温箱,双蒸水或去离子水

4. 吸水纸

ELISA标本的制备和贮存

检测可溶性蛋白:根据产品说明书制备血清、血浆标本,由于有些样品对温度敏感极易丧失活性,应尽快分离并分装(一般300500ul/管),大多数标本收集和实验在同一天应贮存在28℃。若无法立即测定,应贮存在-70℃,标本贮存时间一般不宜过长,避免反复冻融。使用前将标本平衡至室温,融化标本严禁使用水浴锅。冻存后或冷藏时间过长的标本可能会出现沉淀或小凝集块,应在实验前离心或过滤(0.45um滤膜)标本,体积少的标本不建议过滤。所有标本的收集要使用无菌管,在无菌/半无菌条件下操作防止污染。



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